实用医学杂志
實用醫學雜誌
실용의학잡지
THE JOURNAL OF PRACTICAL MEDICINE
2009年
13期
2041-2044
,共4页
李传光%谭映霞%沈志坚%张启瑜
李傳光%譚映霞%瀋誌堅%張啟瑜
리전광%담영하%침지견%장계유
抗原,CD40%PDC316质粒%融合基因%质粒构建%重组腺病毒
抗原,CD40%PDC316質粒%融閤基因%質粒構建%重組腺病毒
항원,CD40%PDC316질립%융합기인%질립구건%중조선병독
目的:构建载有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因片段的腺病毒载体,并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况.方法:提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc-IRS-GFP质粒,测序成功后包装构建Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-IRS-GFP,转染293细胞.出毒后大量复制病毒并纯化,测定病毒滴度,体外感染细胞观察病毒复制及分泌目的蛋白情况并检测目的蛋白表达量.结果:成功构建了质粒及病毒,体外感染显示该病毒能有效地感染细胞并表达蛋白(荧光显示),检测目的蛋白表达量随时间点及浓度增加而增加.当病毒浓度增加到一定程度时目的蛋白表达趋于无明显差异性.结论:构建小鼠融合基因片段并成功转入细胞内、分泌表达目的蛋白是可行的,为进一步研究该病毒在大鼠体内感染及表达CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其机制的研究奠定基础.
目的:構建載有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融閤基因片段的腺病毒載體,併檢測其轉染293細胞後的融閤蛋白錶達及齣毒情況.方法:提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段構建PDC316-IgG2aFc-IRS-GFP質粒,測序成功後包裝構建Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-IRS-GFP,轉染293細胞.齣毒後大量複製病毒併純化,測定病毒滴度,體外感染細胞觀察病毒複製及分泌目的蛋白情況併檢測目的蛋白錶達量.結果:成功構建瞭質粒及病毒,體外感染顯示該病毒能有效地感染細胞併錶達蛋白(熒光顯示),檢測目的蛋白錶達量隨時間點及濃度增加而增加.噹病毒濃度增加到一定程度時目的蛋白錶達趨于無明顯差異性.結論:構建小鼠融閤基因片段併成功轉入細胞內、分泌錶達目的蛋白是可行的,為進一步研究該病毒在大鼠體內感染及錶達CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其機製的研究奠定基礎.
목적:구건재유소서CD40-IgG2aFc-IRS-GFP융합기인편단적선병독재체,병검측기전염293세포후적융합단백표체급출독정황.방법:제취소서CD40、IgG2aFc기인편단구건PDC316-IgG2aFc-IRS-GFP질립,측서성공후포장구건Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-IRS-GFP,전염293세포.출독후대량복제병독병순화,측정병독적도,체외감염세포관찰병독복제급분비목적단백정황병검측목적단백표체량.결과:성공구건료질립급병독,체외감염현시해병독능유효지감염세포병표체단백(형광현시),검측목적단백표체량수시간점급농도증가이증가.당병독농도증가도일정정도시목적단백표체추우무명현차이성.결론:구건소서융합기인편단병성공전입세포내、분비표체목적단백시가행적,위진일보연구해병독재대서체내감염급표체CD40Ig、대서간이식모형면역내수급기궤제적연구전정기출.
