CAJ | 학술논문

如果肝脏严重受损致使肝细胞大部分坏死,或由于某些原因(肝毒性物质、致癌物质的作用)抑制残存肝细胞增殖时,肝内前体/干细胞--肝卵圆细胞便被激活并分化生成肝细胞和胆管细胞等以参与肝修复.基于此理论,人们建立了啮齿类动物肝卵圆细胞诱导实验模型.但显然上述模型不适用于人类,所以有必要开发一种适用于人类的、高效的肝卵圆细胞的新诱导模型.选用小鼠胚胎干细胞,转成拟胚体分化3天后分组,诱导组添加肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)作定向诱导分化.其间用免疫细胞化学(ICC)检测肝卵圆细胞标志物A6等的表达,用流式细胞仪筛选肝卵圆细胞并行RT-PCR、透射电镜检测.所筛选的肝卵圆细胞进一步体外培养并进行ICC和RT-PCR,检测其分化生成成熟的肝细胞和胆管细胞的能力.研究证实胚胎干细胞体外定向诱导生成肝实质细胞的过程中,存在着有双向分化能力的肝卵圆细胞这个中间分化阶段.诱导组肝卵圆细胞分化率均显著地高于对照组,最高时可达6.11%左右.HGF和EGF能显著性诱导胚胎干细胞源性卵圆细胞的生成.流式细胞仪筛选Sca-1+/CD34+细胞占总细胞数的4.59%,其中A6阳性肝卵圆细胞占90.81%左右.使用流式细胞仪可获得高富集的A6+/Sca-1+/CD34+肝卵圆细胞.提供了一种可适用于人类的肝卵圆细胞的新诱导模型.
여과간장엄중수손치사간세포대부분배사,혹유우모사원인(간독성물질、치암물질적작용)억제잔존간세포증식시,간내전체/간세포--간란원세포편피격활병분화생성간세포화담관세포등이삼여간수복.기우차이론,인문건립료교치류동물간란원세포유도실험모형.단현연상술모형불괄용우인류,소이유필요개발일충괄용우인류적、고효적간란원세포적신유도모형.선용소서배태간세포,전성의배체분화3천후분조,유도조첨가간세포생장인자(HGF)、표피생장인자(EGF)작정향유도분화.기간용면역세포화학(ICC)검측간란원세포표지물A6등적표체,용류식세포의사선간란원세포병행RT-PCR、투사전경검측.소사선적간란원세포진일보체외배양병진행ICC화RT-PCR,검측기분화생성성숙적간세포화담관세포적능력.연구증실배태간세포체외정향유도생성간실질세포적과정중,존재착유쌍향분화능력적간란원세포저개중간분화계단.유도조간란원세포분화솔균현저지고우대조조,최고시가체6.11%좌우.HGF화EGF능현저성유도배태간세포원성란원세포적생성.류식세포의사선Sca-1+/CD34+세포점총세포수적4.59%,기중A6양성간란원세포점90.81%좌우.사용류식세포의가획득고부집적A6+/Sca-1+/CD34+간란원세포.제공료일충가괄용우인류적간란원세포적신유도모형.