广州中医药大学学报
廣州中醫藥大學學報
엄주중의약대학학보
JOURNAL OF GUANGZHOU UNIVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
2007年
1期
37-40
,共4页
冼绍祥%杨忠奇%汪朝晖%李南夷%赵立诚
冼紹祥%楊忠奇%汪朝暉%李南夷%趙立誠
승소상%양충기%왕조휘%리남이%조립성
黄芪甲苷/药理学%心肌梗死/中药疗法%骨髓间充质干细胞%细胞培养
黃芪甲苷/藥理學%心肌梗死/中藥療法%骨髓間充質榦細胞%細胞培養
황기갑감/약이학%심기경사/중약요법%골수간충질간세포%세포배양
[目的]观察黄芪甲苷体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化为心肌样细胞的作用.[方法]采用密度梯度离心和贴壁培养法分离大鼠MSCs,反复传代及纯化后,取第3代MSCs,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34和CD44;取第8代MSCs进行分组诱导:黄芪甲苷组(终浓度为250mg/L)、5-氮胞苷(5-aza,终浓度为10 μmol/L)、黄芪甲苷加5-aza组(终浓度分别为250mg/L与10/μmol/L),并设空白对照组,诱导后继续培养4周;计算心肌样细胞诱导率,采用免疫组化法鉴定诱导后MSCs中结蛋白(Desmin)和心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)的表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法鉴定诱导后MSCs中心肌特异性蛋白α-心肌肌球蛋白重链(α-MHC)和β-心肌肌球蛋白重链(β-MHC)信使核糖核酸(mRNA)的表达.[结果]原代培养的MSCs首先形成集落,传代细胞体积变大,诱导后细胞呈梭形,并出现肌管;MSCs表面抗原CD44表达阳性,而骨髓造血干细胞表面抗原CD34表达阴性,表明本实验方法所得细胞为均一的MSCs细胞群;各组在不同时间的心肌样细胞诱导率无明显差异;免疫组化结果显示诱导后MSCs表达心肌特异性蛋白Desmin和cTnI;RT-PCR结果显示诱导后MSCs表达成熟的心肌特异性蛋白α-MHC和β-MHC.[结论]黄芪甲苷可在体外诱导大鼠MSCs定向分化为心肌样细胞,但诱导率仍有待提高.
[目的]觀察黃芪甲苷體外誘導骨髓間充質榦細胞(MSCs)定嚮分化為心肌樣細胞的作用.[方法]採用密度梯度離心和貼壁培養法分離大鼠MSCs,反複傳代及純化後,取第3代MSCs,採用流式細胞儀檢測細胞錶麵抗原CD34和CD44;取第8代MSCs進行分組誘導:黃芪甲苷組(終濃度為250mg/L)、5-氮胞苷(5-aza,終濃度為10 μmol/L)、黃芪甲苷加5-aza組(終濃度分彆為250mg/L與10/μmol/L),併設空白對照組,誘導後繼續培養4週;計算心肌樣細胞誘導率,採用免疫組化法鑒定誘導後MSCs中結蛋白(Desmin)和心肌特異性肌鈣蛋白I(cTnI)的錶達,採用逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)法鑒定誘導後MSCs中心肌特異性蛋白α-心肌肌毬蛋白重鏈(α-MHC)和β-心肌肌毬蛋白重鏈(β-MHC)信使覈糖覈痠(mRNA)的錶達.[結果]原代培養的MSCs首先形成集落,傳代細胞體積變大,誘導後細胞呈梭形,併齣現肌管;MSCs錶麵抗原CD44錶達暘性,而骨髓造血榦細胞錶麵抗原CD34錶達陰性,錶明本實驗方法所得細胞為均一的MSCs細胞群;各組在不同時間的心肌樣細胞誘導率無明顯差異;免疫組化結果顯示誘導後MSCs錶達心肌特異性蛋白Desmin和cTnI;RT-PCR結果顯示誘導後MSCs錶達成熟的心肌特異性蛋白α-MHC和β-MHC.[結論]黃芪甲苷可在體外誘導大鼠MSCs定嚮分化為心肌樣細胞,但誘導率仍有待提高.
[목적]관찰황기갑감체외유도골수간충질간세포(MSCs)정향분화위심기양세포적작용.[방법]채용밀도제도리심화첩벽배양법분리대서MSCs,반복전대급순화후,취제3대MSCs,채용류식세포의검측세포표면항원CD34화CD44;취제8대MSCs진행분조유도:황기갑감조(종농도위250mg/L)、5-담포감(5-aza,종농도위10 μmol/L)、황기갑감가5-aza조(종농도분별위250mg/L여10/μmol/L),병설공백대조조,유도후계속배양4주;계산심기양세포유도솔,채용면역조화법감정유도후MSCs중결단백(Desmin)화심기특이성기개단백I(cTnI)적표체,채용역전록취합매련반응(RT-PCR)법감정유도후MSCs중심기특이성단백α-심기기구단백중련(α-MHC)화β-심기기구단백중련(β-MHC)신사핵당핵산(mRNA)적표체.[결과]원대배양적MSCs수선형성집락,전대세포체적변대,유도후세포정사형,병출현기관;MSCs표면항원CD44표체양성,이골수조혈간세포표면항원CD34표체음성,표명본실험방법소득세포위균일적MSCs세포군;각조재불동시간적심기양세포유도솔무명현차이;면역조화결과현시유도후MSCs표체심기특이성단백Desmin화cTnI;RT-PCR결과현시유도후MSCs표체성숙적심기특이성단백α-MHC화β-MHC.[결론]황기갑감가재체외유도대서MSCs정향분화위심기양세포,단유도솔잉유대제고.
