中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2007年
9期
772-777
,共6页
郁心%叶震敏%盛伟华%杨吉成%缪竞诚
鬱心%葉震敏%盛偉華%楊吉成%繆競誠
욱심%협진민%성위화%양길성%무경성
LIF%IL-24基因%HL-60细胞%凋亡
LIF%IL-24基因%HL-60細胞%凋亡
LIF%IL-24기인%HL-60세포%조망
目的:构建能稳定表达白血病抑制因子(LIF)的转基因细胞,并研究所表达的LIF与IL-24基因在诱导HL-60细胞凋亡方面的协同作用.方法:用真核表达质粒pcDNA3-LIF转染ECV304细胞, G418筛选阳性细胞,收集阳性细胞和培养上清,RT-PCR检测LIF mRNA的表达.同时在已转化重组腺病毒质粒的大肠杆菌中抽提质粒pAdEasy-1-pTrack-CMV-IL-24,用PacI酶切使重组腺病毒质粒线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,收获Ad-IL-24腺病毒子.将重组病毒子(Ad-IL-24)感染HL-60细胞, 同时加入含LIF的培养上清,并设对照组,RT-PCR检测IL-24 mRNA表达, 光镜下观察HL-60细胞形态的变化, 激光扫描共聚焦显微镜观察细胞凋亡改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学分析凋亡因子的改变.结果:成功构建能稳定表达LIF蛋白的转基因细胞;获得高滴度的重组腺病毒Ad-IL-24,用它感染HL-60细胞后,能检测到IL-24mRNA的表达.各种检测方法表明LIF、IL-24基因都能抑制HL-60细胞生长、诱导凋亡,且两者具有协同作用.结论:LIF、IL-24基因都能抑制HL-60细胞生长,诱导凋亡,两者具有协同作用.
目的:構建能穩定錶達白血病抑製因子(LIF)的轉基因細胞,併研究所錶達的LIF與IL-24基因在誘導HL-60細胞凋亡方麵的協同作用.方法:用真覈錶達質粒pcDNA3-LIF轉染ECV304細胞, G418篩選暘性細胞,收集暘性細胞和培養上清,RT-PCR檢測LIF mRNA的錶達.同時在已轉化重組腺病毒質粒的大腸桿菌中抽提質粒pAdEasy-1-pTrack-CMV-IL-24,用PacI酶切使重組腺病毒質粒線性化,脂質體轉染QBI-293A細胞,收穫Ad-IL-24腺病毒子.將重組病毒子(Ad-IL-24)感染HL-60細胞, 同時加入含LIF的培養上清,併設對照組,RT-PCR檢測IL-24 mRNA錶達, 光鏡下觀察HL-60細胞形態的變化, 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察細胞凋亡改變,流式細胞儀檢測細胞凋亡率,免疫細胞化學分析凋亡因子的改變.結果:成功構建能穩定錶達LIF蛋白的轉基因細胞;穫得高滴度的重組腺病毒Ad-IL-24,用它感染HL-60細胞後,能檢測到IL-24mRNA的錶達.各種檢測方法錶明LIF、IL-24基因都能抑製HL-60細胞生長、誘導凋亡,且兩者具有協同作用.結論:LIF、IL-24基因都能抑製HL-60細胞生長,誘導凋亡,兩者具有協同作用.
목적:구건능은정표체백혈병억제인자(LIF)적전기인세포,병연구소표체적LIF여IL-24기인재유도HL-60세포조망방면적협동작용.방법:용진핵표체질립pcDNA3-LIF전염ECV304세포, G418사선양성세포,수집양성세포화배양상청,RT-PCR검측LIF mRNA적표체.동시재이전화중조선병독질립적대장간균중추제질립pAdEasy-1-pTrack-CMV-IL-24,용PacI매절사중조선병독질립선성화,지질체전염QBI-293A세포,수획Ad-IL-24선병독자.장중조병독자(Ad-IL-24)감염HL-60세포, 동시가입함LIF적배양상청,병설대조조,RT-PCR검측IL-24 mRNA표체, 광경하관찰HL-60세포형태적변화, 격광소묘공취초현미경관찰세포조망개변,류식세포의검측세포조망솔,면역세포화학분석조망인자적개변.결과:성공구건능은정표체LIF단백적전기인세포;획득고적도적중조선병독Ad-IL-24,용타감염HL-60세포후,능검측도IL-24mRNA적표체.각충검측방법표명LIF、IL-24기인도능억제HL-60세포생장、유도조망,차량자구유협동작용.결론:LIF、IL-24기인도능억제HL-60세포생장,유도조망,량자구유협동작용.
