CAJ | 학술논문

为了为核移植提供供体细胞,本研究构建了真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1,并研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的体外分离培养,进行了Ipr1基因转染.克隆Ipr1基因和SR-A启动子,并构建了巨噬细胞特异性真核表达载体.用组织块贴壁法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞,在体外经传代、纯化后,用电穿孔法将真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1转染至经体外纯化的第4～10代牛胎儿成纤维细胞,24 h后观察荧光表达,48 h后加入600μg·mL-1 G418,筛选1周,300 p.g·mL-1持续筛选,然后挑选单克隆,继续扩大培养.对稳定转染的牛胎儿成纤维细胞进行PCR检测和核型分析.结果,转染24 h后有绿色荧光蛋白表达,并经G418筛选获得稳定转染PEGFP-SRA-Ipr1的牛胎儿成纤维细胞株,经PCR检测在大约1500 bp处有目的片段,经流式细胞仪分析转染细胞染色体倍型未发生变化,仍是二倍体.说明目的基因已经成功整合,同时保持了遗传稳定性.可以作为核移植进行转基因克隆牛研究.
위료위핵이식제공공체세포,본연구구건료진핵표체재체PEGFP-SRA-Ipr1,병연구료우태인피부성섬유세포적체외분리배양,진행료Ipr1기인전염.극륭Ipr1기인화SR-A계동자,병구건료거서세포특이성진핵표체재체.용조직괴첩벽법분리배양우태인피부성섬유세포,재체외경전대、순화후,용전천공법장진핵표체재체PEGFP-SRA-Ipr1전염지경체외순화적제4～10대우태인성섬유세포,24 h후관찰형광표체,48 h후가입600μg·mL-1 G418,사선1주,300 p.g·mL-1지속사선,연후도선단극륭,계속확대배양.대은정전염적우태인성섬유세포진행PCR검측화핵형분석.결과,전염24 h후유록색형광단백표체,병경G418사선획득은정전염PEGFP-SRA-Ipr1적우태인성섬유세포주,경PCR검측재대약1500 bp처유목적편단,경류식세포의분석전염세포염색체배형미발생변화,잉시이배체.설명목적기인이경성공정합,동시보지료유전은정성.가이작위핵이식진행전기인극륭우연구.