南京林业大学学报（自然科学版）
南京林業大學學報（自然科學版）
남경임업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING FORESTRY UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2012年
1期
28-32
,共5页
张林平%叶建仁%李月阳%黄麟%许剑涛%张扬
張林平%葉建仁%李月暘%黃麟%許劍濤%張颺
장림평%협건인%리월양%황린%허검도%장양
异角状拟盘多毛孢菌%根癌农杆菌%遗传转化%转化效率
異角狀擬盤多毛孢菌%根癌農桿菌%遺傳轉化%轉化效率
이각상의반다모포균%근암농간균%유전전화%전화효솔
以携带潮霉素B磷酸转移酶抗性基因(hph)的pBHt1作为转化载体,根癌农杆菌AGL -1作为转化介体,实施转化异角状拟盘多毛孢菌.研究发现,异角状拟盘多毛孢菌的最优转化体系为:异角状拟盘多毛孢菌分生孢子悬浮液浓度为1×106个/mL,根癌农杆菌OD600为0.3,共培养时间48 h,共培养温度为25℃,诱导培养基中乙酰丁香酮(AS)浓度为200 μmol/L,选择培养基添加250 μg/mL潮霉素B、250 μg/mL头孢噻肟钠.1×106个异角状拟盘多毛孢菌分生孢子可以产生200～300个转化子,随机挑选10个转化子进行PCR检测,均能扩增出预期条带,且在不含潮霉素B的PDA培养基平板上转化子连续培养5代后,hph基因仍能稳定遗传,这表明T- DNA已经插入到异角状拟盘多毛孢菌的基因组中.此次建立的异角状拟盘多毛孢菌的转化体系可为该病菌的功能基因研究和寄主与病原菌的互作研究提供有效的工具.
以攜帶潮黴素B燐痠轉移酶抗性基因(hph)的pBHt1作為轉化載體,根癌農桿菌AGL -1作為轉化介體,實施轉化異角狀擬盤多毛孢菌.研究髮現,異角狀擬盤多毛孢菌的最優轉化體繫為:異角狀擬盤多毛孢菌分生孢子懸浮液濃度為1×106箇/mL,根癌農桿菌OD600為0.3,共培養時間48 h,共培養溫度為25℃,誘導培養基中乙酰丁香酮(AS)濃度為200 μmol/L,選擇培養基添加250 μg/mL潮黴素B、250 μg/mL頭孢噻肟鈉.1×106箇異角狀擬盤多毛孢菌分生孢子可以產生200～300箇轉化子,隨機挑選10箇轉化子進行PCR檢測,均能擴增齣預期條帶,且在不含潮黴素B的PDA培養基平闆上轉化子連續培養5代後,hph基因仍能穩定遺傳,這錶明T- DNA已經插入到異角狀擬盤多毛孢菌的基因組中.此次建立的異角狀擬盤多毛孢菌的轉化體繫可為該病菌的功能基因研究和寄主與病原菌的互作研究提供有效的工具.
이휴대조매소B린산전이매항성기인(hph)적pBHt1작위전화재체,근암농간균AGL -1작위전화개체,실시전화이각상의반다모포균.연구발현,이각상의반다모포균적최우전화체계위:이각상의반다모포균분생포자현부액농도위1×106개/mL,근암농간균OD600위0.3,공배양시간48 h,공배양온도위25℃,유도배양기중을선정향동(AS)농도위200 μmol/L,선택배양기첨가250 μg/mL조매소B、250 μg/mL두포새우납.1×106개이각상의반다모포균분생포자가이산생200～300개전화자,수궤도선10개전화자진행PCR검측,균능확증출예기조대,차재불함조매소B적PDA배양기평판상전화자련속배양5대후,hph기인잉능은정유전,저표명T- DNA이경삽입도이각상의반다모포균적기인조중.차차건립적이각상의반다모포균적전화체계가위해병균적공능기인연구화기주여병원균적호작연구제공유효적공구.
