生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
4期
181-185
,共5页
杨磊%曹以诚%高强%葛洪
楊磊%曹以誠%高彊%葛洪
양뢰%조이성%고강%갈홍
RNAi%肝脏特异性siRNA%重组PCR%HepG2 2.2.15细胞%ELISA
RNAi%肝髒特異性siRNA%重組PCR%HepG2 2.2.15細胞%ELISA
RNAi%간장특이성siRNA%중조PCR%HepG2 2.2.15세포%ELISA
旨在研究靶向于HBsAg的肝脏特异性siRNA,实现核酸药物高靶向性、高特异性基因治疗乙肝.通过重组PCR的方法构建靶向于HBsAg的肝脏特异性表达的siRNA的核酸药物.将目标载体转染HepG2 2.2.15细胞,用ELISA的方法测定转染细胞培养液内HBsAg的含量.PCR鉴定和测序确定重组PAAV-MCS载体PApoE1-ApoE2-hAAT-siHBsAg-U1 3'Box构建成功.重组质粒对HepG2 2.2.15细胞分泌的HBsAg所产生的抑制作用自转染后5d达到高峰,抑制率达到(30±0.28)％(P＜0.01),siRNA特异性表达单元能显著降低HepG2 2.2.15细胞HBV DNA的拷贝数.成功构建的肝脏特异性、siRNA高表达的核酸药物可以有效地抑制HBV基因的表达和复制,为乙肝的进一步治疗研究做了关键性工作.
旨在研究靶嚮于HBsAg的肝髒特異性siRNA,實現覈痠藥物高靶嚮性、高特異性基因治療乙肝.通過重組PCR的方法構建靶嚮于HBsAg的肝髒特異性錶達的siRNA的覈痠藥物.將目標載體轉染HepG2 2.2.15細胞,用ELISA的方法測定轉染細胞培養液內HBsAg的含量.PCR鑒定和測序確定重組PAAV-MCS載體PApoE1-ApoE2-hAAT-siHBsAg-U1 3'Box構建成功.重組質粒對HepG2 2.2.15細胞分泌的HBsAg所產生的抑製作用自轉染後5d達到高峰,抑製率達到(30±0.28)％(P＜0.01),siRNA特異性錶達單元能顯著降低HepG2 2.2.15細胞HBV DNA的拷貝數.成功構建的肝髒特異性、siRNA高錶達的覈痠藥物可以有效地抑製HBV基因的錶達和複製,為乙肝的進一步治療研究做瞭關鍵性工作.
지재연구파향우HBsAg적간장특이성siRNA,실현핵산약물고파향성、고특이성기인치료을간.통과중조PCR적방법구건파향우HBsAg적간장특이성표체적siRNA적핵산약물.장목표재체전염HepG2 2.2.15세포,용ELISA적방법측정전염세포배양액내HBsAg적함량.PCR감정화측서학정중조PAAV-MCS재체PApoE1-ApoE2-hAAT-siHBsAg-U1 3'Box구건성공.중조질립대HepG2 2.2.15세포분비적HBsAg소산생적억제작용자전염후5d체도고봉,억제솔체도(30±0.28)％(P＜0.01),siRNA특이성표체단원능현저강저HepG2 2.2.15세포HBV DNA적고패수.성공구건적간장특이성、siRNA고표체적핵산약물가이유효지억제HBV기인적표체화복제,위을간적진일보치료연구주료관건성공작.
