生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
9期
120-124
,共5页
构建%蛋白表达%鉴定%hPdx1%△-hPdx1
構建%蛋白錶達%鑒定%hPdx1%△-hPdx1
구건%단백표체%감정%hPdx1%△-hPdx1
经鉴定成功构建了hPdx1和△-hPdx1蛋白表达系统,IPTG诱导蛋白表达后Western blot检测在37.2-52.3 kD之间出现了与两种目的蛋白理论分子量相符的蛋白条带.诱导后破碎菌体上清液,经分离纯化最终得到的目的蛋白纯度可达到95％以上.纯化的蛋白加入人胚胎干细胞培养基中1h后通过细胞免疫荧光检测发现,hPdx1蛋白可进入细胞而△-hPdx1不能进入细胞,表明表达得到的蛋白具有生物活性.
經鑒定成功構建瞭hPdx1和△-hPdx1蛋白錶達繫統,IPTG誘導蛋白錶達後Western blot檢測在37.2-52.3 kD之間齣現瞭與兩種目的蛋白理論分子量相符的蛋白條帶.誘導後破碎菌體上清液,經分離純化最終得到的目的蛋白純度可達到95％以上.純化的蛋白加入人胚胎榦細胞培養基中1h後通過細胞免疫熒光檢測髮現,hPdx1蛋白可進入細胞而△-hPdx1不能進入細胞,錶明錶達得到的蛋白具有生物活性.
경감정성공구건료hPdx1화△-hPdx1단백표체계통,IPTG유도단백표체후Western blot검측재37.2-52.3 kD지간출현료여량충목적단백이론분자량상부적단백조대.유도후파쇄균체상청액,경분리순화최종득도적목적단백순도가체도95％이상.순화적단백가입인배태간세포배양기중1h후통과세포면역형광검측발현,hPdx1단백가진입세포이△-hPdx1불능진입세포,표명표체득도적단백구유생물활성.
