温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2004年
3期
163-166
,共4页
岑东%吕建新%裴仁治%刘东海%张顺%陆永绥
岑東%呂建新%裴仁治%劉東海%張順%陸永綏
잠동%려건신%배인치%류동해%장순%륙영수
肝细胞生长因子%mRNA%PCR%参考标准
肝細胞生長因子%mRNA%PCR%參攷標準
간세포생장인자%mRNA%PCR%삼고표준
目的:构建实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准以定量检测人肝细胞生长因子mRNA的表达.方法:采用RT-PCR法利用肝组织提取的总RNA制备肝细胞生长因子cDNA目的片段.与pGEM-TEasy Vector连接成重组质粒并转化E.coli DH5α.联合用直接PCR、α互补和氨苄青霉素筛选法、EcoRI限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性.测定纯化的重组质粒A260,确定浓度并以此制备FQ-PCR梯度浓度参考标准.结果:HGF cDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性.结论:成功构建了实时FQ-PCR定量参考标准.
目的:構建實時熒光定量PCR(FQ-PCR)標準以定量檢測人肝細胞生長因子mRNA的錶達.方法:採用RT-PCR法利用肝組織提取的總RNA製備肝細胞生長因子cDNA目的片段.與pGEM-TEasy Vector連接成重組質粒併轉化E.coli DH5α.聯閤用直接PCR、α互補和氨芐青黴素篩選法、EcoRI限製性酶切和序列分析法鑒定其特異性.測定純化的重組質粒A260,確定濃度併以此製備FQ-PCR梯度濃度參攷標準.結果:HGF cDNA目的片段成功製備併穫得穩定的重組質粒,保持瞭目的片段的特異性和序列完整性.結論:成功構建瞭實時FQ-PCR定量參攷標準.
목적:구건실시형광정량PCR(FQ-PCR)표준이정량검측인간세포생장인자mRNA적표체.방법:채용RT-PCR법이용간조직제취적총RNA제비간세포생장인자cDNA목적편단.여pGEM-TEasy Vector련접성중조질립병전화E.coli DH5α.연합용직접PCR、α호보화안변청매소사선법、EcoRI한제성매절화서렬분석법감정기특이성.측정순화적중조질립A260,학정농도병이차제비FQ-PCR제도농도삼고표준.결과:HGF cDNA목적편단성공제비병획득은정적중조질립,보지료목적편단적특이성화서렬완정성.결론:성공구건료실시FQ-PCR정량삼고표준.
