四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2006年
6期
839-843
,共5页
抗血管生成%人内皮抑素%简化人纤溶酶原饼环区5%不相容质粒%共表达
抗血管生成%人內皮抑素%簡化人纖溶酶原餅環區5%不相容質粒%共錶達
항혈관생성%인내피억소%간화인섬용매원병배구5%불상용질립%공표체
目的 构建人内皮抑素(human endostatin,hES)原核表达质粒pET28a/hES并与简化人纤溶酶原饼环区5(predigested human plasminogen kringle 5,predhPK-5)在大肠杆菌中实现共表达. 方法 RT-PCR法从人肝癌组织中扩增人内皮抑素基因,利用基因克隆技术构建原核表达质粒pET28a/hES.在卡那霉素与氨苄青霉素的选择压力下,将其与pGEX-1λT/predhPK-5共同转化E.coli BL21(DE3),并诱导表达重组蛋白.同时从连续培养时间与传代次数两方面检测了共转化子的稳定性. 结果 成功构建了重组质粒pET28a/hES,其与pGEX-1λT/predhPK-5的共转化子在双抗生素压力下可以共存,并在E.coli BL21(DE3)中成功共表达了人内皮抑素及简化的人纤溶酶原饼环区5,其表达量分别占蛋白总量的20%和21%.在双抗性培养基中培养16 h及传代120代,共转化子存活率均大于75%,具有较好的稳定性.结论 不相容质粒pET28a/hES与pGEX-1λT/predhPK-5在大肠杆菌中的成功共表达,对基因共表达方法作了有益探索,验证了不相容质粒共表达方法的可行性.
目的 構建人內皮抑素(human endostatin,hES)原覈錶達質粒pET28a/hES併與簡化人纖溶酶原餅環區5(predigested human plasminogen kringle 5,predhPK-5)在大腸桿菌中實現共錶達. 方法 RT-PCR法從人肝癌組織中擴增人內皮抑素基因,利用基因剋隆技術構建原覈錶達質粒pET28a/hES.在卡那黴素與氨芐青黴素的選擇壓力下,將其與pGEX-1λT/predhPK-5共同轉化E.coli BL21(DE3),併誘導錶達重組蛋白.同時從連續培養時間與傳代次數兩方麵檢測瞭共轉化子的穩定性. 結果 成功構建瞭重組質粒pET28a/hES,其與pGEX-1λT/predhPK-5的共轉化子在雙抗生素壓力下可以共存,併在E.coli BL21(DE3)中成功共錶達瞭人內皮抑素及簡化的人纖溶酶原餅環區5,其錶達量分彆佔蛋白總量的20%和21%.在雙抗性培養基中培養16 h及傳代120代,共轉化子存活率均大于75%,具有較好的穩定性.結論 不相容質粒pET28a/hES與pGEX-1λT/predhPK-5在大腸桿菌中的成功共錶達,對基因共錶達方法作瞭有益探索,驗證瞭不相容質粒共錶達方法的可行性.
목적 구건인내피억소(human endostatin,hES)원핵표체질립pET28a/hES병여간화인섬용매원병배구5(predigested human plasminogen kringle 5,predhPK-5)재대장간균중실현공표체. 방법 RT-PCR법종인간암조직중확증인내피억소기인,이용기인극륭기술구건원핵표체질립pET28a/hES.재잡나매소여안변청매소적선택압력하,장기여pGEX-1λT/predhPK-5공동전화E.coli BL21(DE3),병유도표체중조단백.동시종련속배양시간여전대차수량방면검측료공전화자적은정성. 결과 성공구건료중조질립pET28a/hES,기여pGEX-1λT/predhPK-5적공전화자재쌍항생소압력하가이공존,병재E.coli BL21(DE3)중성공공표체료인내피억소급간화적인섬용매원병배구5,기표체량분별점단백총량적20%화21%.재쌍항성배양기중배양16 h급전대120대,공전화자존활솔균대우75%,구유교호적은정성.결론 불상용질립pET28a/hES여pGEX-1λT/predhPK-5재대장간균중적성공공표체,대기인공표체방법작료유익탐색,험증료불상용질립공표체방법적가행성.
