西部医学
西部醫學
서부의학
MEDICAL JOURNAL OF WEST CHINA
2007年
3期
350-352,355
,共4页
杨晓芳%赵培%李虹%李婉宜%庄永华%蒋忠华%李明远
楊曉芳%趙培%李虹%李婉宜%莊永華%蔣忠華%李明遠
양효방%조배%리홍%리완의%장영화%장충화%리명원
流感病毒%PB1%RNA干扰%质粒载体
流感病毒%PB1%RNA榦擾%質粒載體
류감병독%PB1%RNA간우%질립재체
目的 研究重组质粒pSIREN/PB1在鸡胚尿囊液中干扰甲型流感病毒复制的效果.方法 设计1对编码PB1siRNA的寡核苷酸序列,经退火互补形成双链,再克隆至带有U6启动子的RNAi ready pSIREN-shuttle线性化载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,双酶切和测序鉴定重组质粒pSIREN/PB1.大量提取重组质粒pSIREN.PB1,用脂质体进行包裹后,按每只鸡胚90 μg质粒量接种于10日龄鸡胚尿囊腔,4血凝单位甲型流感病毒液分别于质粒接种后0 h、24 h、48 h接种于鸡胚尿囊腔,流感病毒接种48 h后收集无色澄清尿囊液进行血凝实验检测流感病毒效价.结果 甲型流感病毒PB1基因的siRNA编码序列成功克隆至pSIREN质粒载体.经酶切和测序分析,重组质粒pSIREN/PB1中的siRNA编码序列均完全正确.将脂质体包裹的pSIREN.PB1质粒和病毒液同时注射入鸡胚尿囊腔后,收获的甲型流感病毒效价最低.结论 成功构建了表达甲型流感病毒PB1siRNA的重组质粒pSIREN.PB1,并且它可以抑制鸡胚中流感病毒复制.此研究进一步证实了RNA干扰对流感病毒复制的抑制作用,为开发流感基因防治新方法奠定了基础.
目的 研究重組質粒pSIREN/PB1在鷄胚尿囊液中榦擾甲型流感病毒複製的效果.方法 設計1對編碼PB1siRNA的寡覈苷痠序列,經退火互補形成雙鏈,再剋隆至帶有U6啟動子的RNAi ready pSIREN-shuttle線性化載體,轉化大腸桿菌JM109感受態細胞,雙酶切和測序鑒定重組質粒pSIREN/PB1.大量提取重組質粒pSIREN.PB1,用脂質體進行包裹後,按每隻鷄胚90 μg質粒量接種于10日齡鷄胚尿囊腔,4血凝單位甲型流感病毒液分彆于質粒接種後0 h、24 h、48 h接種于鷄胚尿囊腔,流感病毒接種48 h後收集無色澄清尿囊液進行血凝實驗檢測流感病毒效價.結果 甲型流感病毒PB1基因的siRNA編碼序列成功剋隆至pSIREN質粒載體.經酶切和測序分析,重組質粒pSIREN/PB1中的siRNA編碼序列均完全正確.將脂質體包裹的pSIREN.PB1質粒和病毒液同時註射入鷄胚尿囊腔後,收穫的甲型流感病毒效價最低.結論 成功構建瞭錶達甲型流感病毒PB1siRNA的重組質粒pSIREN.PB1,併且它可以抑製鷄胚中流感病毒複製.此研究進一步證實瞭RNA榦擾對流感病毒複製的抑製作用,為開髮流感基因防治新方法奠定瞭基礎.
목적 연구중조질립pSIREN/PB1재계배뇨낭액중간우갑형류감병독복제적효과.방법 설계1대편마PB1siRNA적과핵감산서렬,경퇴화호보형성쌍련,재극륭지대유U6계동자적RNAi ready pSIREN-shuttle선성화재체,전화대장간균JM109감수태세포,쌍매절화측서감정중조질립pSIREN/PB1.대량제취중조질립pSIREN.PB1,용지질체진행포과후,안매지계배90 μg질립량접충우10일령계배뇨낭강,4혈응단위갑형류감병독액분별우질립접충후0 h、24 h、48 h접충우계배뇨낭강,류감병독접충48 h후수집무색징청뇨낭액진행혈응실험검측류감병독효개.결과 갑형류감병독PB1기인적siRNA편마서렬성공극륭지pSIREN질립재체.경매절화측서분석,중조질립pSIREN/PB1중적siRNA편마서렬균완전정학.장지질체포과적pSIREN.PB1질립화병독액동시주사입계배뇨낭강후,수획적갑형류감병독효개최저.결론 성공구건료표체갑형류감병독PB1siRNA적중조질립pSIREN.PB1,병차타가이억제계배중류감병독복제.차연구진일보증실료RNA간우대류감병독복제적억제작용,위개발류감기인방치신방법전정료기출.
