CAJ | 학술논문

采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)-硅珠法提取光皮桦Betula luminifera嫩叶DNA,利用近缘种日本白桦B.platyphylla var.japonica和欧洲白桦B.pendula的引物,建立先皮桦简单重复序列标记(SSR)反应体系.在体系建立过程中,采用单因素法分别对影响聚合酶链式反应(PCR)反应的因素进行分析.结果表明:在20μL反应体系中,模板DNA用量、Mg2+浓度、脱氧核糖核苷酸(dNTPs)浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量分别为60ng,1.500mmol·L-1,0.175mmol·L-1,2.500 mmol·L-1,1.0×16.67 nkat时结果最好;引物退火温度比日本白桦扩增时提高1℃时效果佳.PCR扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后随机挑取其中3对引物扩增的多态性片段进行克隆测序,对引物的通用性做进一步检验,序列经比对后得到的与原物种序列相似度(max ident值)均在95.0%以上.可见,近缘种日本白桦和欧洲白桦的SSR引物可以在光皮桦上应用.
채용십륙완기삼갑기추화안(CTAB)-규주법제취광피화Betula luminifera눈협DNA,이용근연충일본백화B.platyphylla var.japonica화구주백화B.pendula적인물,건립선피화간단중복서렬표기(SSR)반응체계.재체계건립과정중,채용단인소법분별대영향취합매련식반응(PCR)반응적인소진행분석.결과표명:재20μL반응체계중,모판DNA용량、Mg2+농도、탈양핵당핵감산(dNTPs)농도、인물농도、Taq DNA취합매용량분별위60ng,1.500mmol·L-1,0.175mmol·L-1,2.500 mmol·L-1,1.0×16.67 nkat시결과최호;인물퇴화온도비일본백화확증시제고1℃시효과가.PCR확증산물경취병희선알응효전영후수궤도취기중3대인물확증적다태성편단진행극륭측서,대인물적통용성주진일보검험,서렬경비대후득도적여원물충서렬상사도(max ident치)균재95.0%이상.가견,근연충일본백화화구주백화적SSR인물가이재광피화상응용.