热休克蛋白60基因定点诱变导致其在细胞内定位的改变
열휴극단백60기인정점유변도치기재세포내정위적개변
Site -directed Mutation of Serine70 on HSP60 Subcellular Relocation
  • 万方数据
    宁夏医科大学学报 저하의과대학학보
    JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
    2011年 7期 609-611,618 ,共4页

    王银%李云鸿%滕鹏%成文静%张玉梅%苗珍花%蒲静%马娇%张楠%游丽琴

    왕은%리운홍%등붕%성문정%장옥매%묘진화%포정%마교%장남%유려금

    HSP60%定点诱变%细胞内的定位%磷酸化位点 HSP60%定點誘變%細胞內的定位%燐痠化位點
    HSP60%정점유변%세포내적정위%린산화위점
    目的 研究将热休克蛋白60(HSP60)蛋白序列中第70位的丝氨酸(serine)突变为丙氨酸(alanine)后,HSP60在细胞内定位的改变.方法 将PrC/CMV - HSP60P1重组质粒中HSP60P1编码第70位丝氨酸的碱基定点诱变为编码丙氨酸的碱基序列,转染至小胶质细胞BV -2细胞株中表达.细胞经10h缺氧处理后,裂解细胞,应用差速离心方法 分离细胞膜、细胞质和线粒体,应用Western- blot方法 检测各细胞器中HSP60的含量.结果 在转染未诱变PrC/CMV - HSP60P1质粒的细胞中,正常情况下,HSP60大部分分布在线粒体,少部分在胞浆,细胞膜中未见表达；缺氧刺激后,HSP60在细胞膜、胞浆和线粒体中均有表达；然而70位丝氨酸突变为丙氨酸后,只观察到HSP60在胞浆和线粒体中的表达,而在细胞膜上未见表达.结论 作为磷酸化位点的Serine70对HSP60在细胞内的定位具有关键作用.
    목적 연구장열휴극단백60(HSP60)단백서렬중제70위적사안산(serine)돌변위병안산(alanine)후,HSP60재세포내정위적개변.방법 장PrC/CMV - HSP60P1중조질립중HSP60P1편마제70위사안산적감기정점유변위편마병안산적감기서렬,전염지소효질세포BV -2세포주중표체.세포경10h결양처리후,렬해세포,응용차속리심방법 분리세포막、세포질화선립체,응용Western- blot방법 검측각세포기중HSP60적함량.결과 재전염미유변PrC/CMV - HSP60P1질립적세포중,정상정황하,HSP60대부분분포재선립체,소부분재포장,세포막중미견표체；결양자격후,HSP60재세포막、포장화선립체중균유표체；연이70위사안산돌변위병안산후,지관찰도HSP60재포장화선립체중적표체,이재세포막상미견표체.결론 작위린산화위점적Serine70대HSP60재세포내적정위구유관건작용.
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