农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2010年
2期
352-355
,共4页
潘朝思%罗宝正%薄清如%莫秋华%徐海聂%沙才华%廖秀云
潘朝思%囉寶正%薄清如%莫鞦華%徐海聶%沙纔華%廖秀雲
반조사%라보정%박청여%막추화%서해섭%사재화%료수운
甲型流感病毒%H1N1亚型%多重实时RT-PCR
甲型流感病毒%H1N1亞型%多重實時RT-PCR
갑형류감병독%H1N1아형%다중실시RT-PCR
从GenBank中获取新型甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)HA和NA基因序列,通过多重序列比对之后,设计合成H1和N1基因特异性的引物和探针,用来建立新的甲型H1N1亚型流感病毒的多重实时RT-PCR检测方法.合成的两条荧光探针分别标记FAM和CY5荧光报告基团,荧光淬灭均使用BHQ基团.多重实时RT-PCR实验在ABl7500实时PCR仪上进行,经过40个循环的扩增之后,阳性对照出现标准的S型曲线,并且具有良好的特异性,可以很好地将新的甲型H1N1与传统的甲型H1N1以及H3N2、H5N1、H6N2和H9N2等流感病毒区分.多重实时RT-PCR可以检测到10个拷贝的模板,灵敏度接近检测方法的极限.检测时间短,从加样到反应结束只需要90 min.在对243例发热病人临床样品检测过程中发现7例阳性,1351份猪临床样品检测中未发现阳性,该检测结果和采用中国检验检疫科学研究院研制的试剂盒获得的检测结果一致.本研究所建立的快速、准确和高敏感性的多重实时RT-PCR方法非常适用于新型甲型H1N1流感病毒的实验室筛查.
從GenBank中穫取新型甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)HA和NA基因序列,通過多重序列比對之後,設計閤成H1和N1基因特異性的引物和探針,用來建立新的甲型H1N1亞型流感病毒的多重實時RT-PCR檢測方法.閤成的兩條熒光探針分彆標記FAM和CY5熒光報告基糰,熒光淬滅均使用BHQ基糰.多重實時RT-PCR實驗在ABl7500實時PCR儀上進行,經過40箇循環的擴增之後,暘性對照齣現標準的S型麯線,併且具有良好的特異性,可以很好地將新的甲型H1N1與傳統的甲型H1N1以及H3N2、H5N1、H6N2和H9N2等流感病毒區分.多重實時RT-PCR可以檢測到10箇拷貝的模闆,靈敏度接近檢測方法的極限.檢測時間短,從加樣到反應結束隻需要90 min.在對243例髮熱病人臨床樣品檢測過程中髮現7例暘性,1351份豬臨床樣品檢測中未髮現暘性,該檢測結果和採用中國檢驗檢疫科學研究院研製的試劑盒穫得的檢測結果一緻.本研究所建立的快速、準確和高敏感性的多重實時RT-PCR方法非常適用于新型甲型H1N1流感病毒的實驗室篩查.
종GenBank중획취신형갑형H1N1류감병독(2009년류행주)HA화NA기인서렬,통과다중서렬비대지후,설계합성H1화N1기인특이성적인물화탐침,용래건립신적갑형H1N1아형류감병독적다중실시RT-PCR검측방법.합성적량조형광탐침분별표기FAM화CY5형광보고기단,형광쉬멸균사용BHQ기단.다중실시RT-PCR실험재ABl7500실시PCR의상진행,경과40개순배적확증지후,양성대조출현표준적S형곡선,병차구유량호적특이성,가이흔호지장신적갑형H1N1여전통적갑형H1N1이급H3N2、H5N1、H6N2화H9N2등류감병독구분.다중실시RT-PCR가이검측도10개고패적모판,령민도접근검측방법적겁한.검측시간단,종가양도반응결속지수요90 min.재대243례발열병인림상양품검측과정중발현7례양성,1351빈저림상양품검측중미발현양성,해검측결과화채용중국검험검역과학연구원연제적시제합획득적검측결과일치.본연구소건립적쾌속、준학화고민감성적다중실시RT-PCR방법비상괄용우신형갑형H1N1류감병독적실험실사사.
