生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
2期
93-96
,共4页
强力霉素%转染%诱导%表达调控%SK-Hep1细胞株
彊力黴素%轉染%誘導%錶達調控%SK-Hep1細胞株
강력매소%전염%유도%표체조공%SK-Hep1세포주
建立稳定、高效表达外源基因的SK-Hep1细胞株,以便进一步研究基因的作用.首先将调控质粒pCDNA6/TR转染SK-Hep1细胞,经潮霉素筛选得到多个稳定单克隆.各个单克隆分别扩大培养后,转染pCDNA4/TO/lacZ质粒,再经过DOX(强力霉素)诱导表达,检测β-半乳糖苷酶(β-D galaetosidase,β-gal)活性,从而筛选出高诱导水平低背景表达的SK-Hep1 tet-on细胞株.最后,再将pCDNA4/TO/c-myc质粒转染进SK-Hep1 tet-on细胞株,进一步通过Western blotting检测该系统对下游基因的表达调控.成功建立了一株受DOX调控的高诱导水平低背景表达的细胞株SK-Hep1 tet-on 10#.
建立穩定、高效錶達外源基因的SK-Hep1細胞株,以便進一步研究基因的作用.首先將調控質粒pCDNA6/TR轉染SK-Hep1細胞,經潮黴素篩選得到多箇穩定單剋隆.各箇單剋隆分彆擴大培養後,轉染pCDNA4/TO/lacZ質粒,再經過DOX(彊力黴素)誘導錶達,檢測β-半乳糖苷酶(β-D galaetosidase,β-gal)活性,從而篩選齣高誘導水平低揹景錶達的SK-Hep1 tet-on細胞株.最後,再將pCDNA4/TO/c-myc質粒轉染進SK-Hep1 tet-on細胞株,進一步通過Western blotting檢測該繫統對下遊基因的錶達調控.成功建立瞭一株受DOX調控的高誘導水平低揹景錶達的細胞株SK-Hep1 tet-on 10#.
건립은정、고효표체외원기인적SK-Hep1세포주,이편진일보연구기인적작용.수선장조공질립pCDNA6/TR전염SK-Hep1세포,경조매소사선득도다개은정단극륭.각개단극륭분별확대배양후,전염pCDNA4/TO/lacZ질립,재경과DOX(강력매소)유도표체,검측β-반유당감매(β-D galaetosidase,β-gal)활성,종이사선출고유도수평저배경표체적SK-Hep1 tet-on세포주.최후,재장pCDNA4/TO/c-myc질립전염진SK-Hep1 tet-on세포주,진일보통과Western blotting검측해계통대하유기인적표체조공.성공건립료일주수DOX조공적고유도수평저배경표체적세포주SK-Hep1 tet-on 10#.
