生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2012年
2期
4-8
,共5页
黄巍%李小鸥%周丽荣%黄晓刚%刘桥
黃巍%李小鷗%週麗榮%黃曉剛%劉橋
황외%리소구%주려영%황효강%류교
ADAM10%真核表达载体%拼接%突变%DH5α%BL21(DE3)
ADAM10%真覈錶達載體%拼接%突變%DH5α%BL21(DE3)
ADAM10%진핵표체재체%병접%돌변%DH5α%BL21(DE3)
目的:构建ADAMI0真核表达载体,为进一步研究其生物学功能打基础.方法:将人ADAM10的上下两部分基因片段(分别为全长基因的1 ～910bp和911 ～2 247bp片段),依次与真核表达载体pcDNA3.1相连,以大肠杆菌DH5α或BL21(DB)作为感受态宿主菌用于转化连接产物,拼接成全长的阳性克隆通过PCR、酶切和测序鉴定.结果:ADAM10下段基因与已正确连入上段的pcDNA3.1重组质粒拼接时,若用DH5α为感受态菌,则下半段出现碱基插入增加512bp,测序结果显示为ADAM10基因第1 531 bp～2 042 bp间的序列有紧邻的双份；若用BL21(DE3)为感受态,则无突变.结论:将ADAM10基因与pcDNA3.1真核表达载体依次拼接构建重组质粒时,以DH5α为宿主菌可出现基因序列增加的罕见突变,而以BL21(DE3)为宿主则无突变,由此成功构建ADAM10全长基因与pcDNA3.1的重组质粒.
目的:構建ADAMI0真覈錶達載體,為進一步研究其生物學功能打基礎.方法:將人ADAM10的上下兩部分基因片段(分彆為全長基因的1 ～910bp和911 ～2 247bp片段),依次與真覈錶達載體pcDNA3.1相連,以大腸桿菌DH5α或BL21(DB)作為感受態宿主菌用于轉化連接產物,拼接成全長的暘性剋隆通過PCR、酶切和測序鑒定.結果:ADAM10下段基因與已正確連入上段的pcDNA3.1重組質粒拼接時,若用DH5α為感受態菌,則下半段齣現堿基插入增加512bp,測序結果顯示為ADAM10基因第1 531 bp～2 042 bp間的序列有緊鄰的雙份；若用BL21(DE3)為感受態,則無突變.結論:將ADAM10基因與pcDNA3.1真覈錶達載體依次拼接構建重組質粒時,以DH5α為宿主菌可齣現基因序列增加的罕見突變,而以BL21(DE3)為宿主則無突變,由此成功構建ADAM10全長基因與pcDNA3.1的重組質粒.
목적:구건ADAMI0진핵표체재체,위진일보연구기생물학공능타기출.방법:장인ADAM10적상하량부분기인편단(분별위전장기인적1 ～910bp화911 ～2 247bp편단),의차여진핵표체재체pcDNA3.1상련,이대장간균DH5α혹BL21(DB)작위감수태숙주균용우전화련접산물,병접성전장적양성극륭통과PCR、매절화측서감정.결과:ADAM10하단기인여이정학련입상단적pcDNA3.1중조질립병접시,약용DH5α위감수태균,칙하반단출현감기삽입증가512bp,측서결과현시위ADAM10기인제1 531 bp～2 042 bp간적서렬유긴린적쌍빈；약용BL21(DE3)위감수태,칙무돌변.결론:장ADAM10기인여pcDNA3.1진핵표체재체의차병접구건중조질립시,이DH5α위숙주균가출현기인서렬증가적한견돌변,이이BL21(DE3)위숙주칙무돌변,유차성공구건ADAM10전장기인여pcDNA3.1적중조질립.
