生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2002年
4期
610-614
,共5页
徐义辉%梁国栋%孙兆军%陈飞%付士红%柴玉波%侯云德
徐義輝%樑國棟%孫兆軍%陳飛%付士紅%柴玉波%侯雲德
서의휘%량국동%손조군%진비%부사홍%시옥파%후운덕
双胸蚓属%蚯蚓纤溶酶%蛋白质测序%克隆%重组表达
雙胸蚓屬%蚯蚓纖溶酶%蛋白質測序%剋隆%重組錶達
쌍흉인속%구인섬용매%단백질측서%극륭%중조표체
从我国特有的双胸蚓属(Lumbricus bimastus)蚯蚓体内提取到一种有纤维蛋白平板溶解活性的蛋白质,采用聚偏二氟乙烯膜(PVDF)微量测序法测得蛋白质的N端氨基酸序列,依此设计简并引物,通过RT-PCR获得其对应cDNA.该cDNA全长888 bp,1～726位核苷酸对应读码框架(ORF),编码含242个氨基酸的成熟肽.终止子(TAG)位于cDNA的727～729位,其余核苷酸序列为3′端非编码区.成熟肽命名为蚯蚓纤溶酶PV242.蛋白质预测得知蛋白质等电点为4.33,含组氨酸(His44)及丝氨酸 (Ser191)两个活性位点;蛋白质由两个结构域组成,表面有活性裂隙;该蛋白质属丝氨酸蛋白酶超家族胰蛋白酶类.经国际基因库等多种查询比较未见PV242基因的报道,为首次发现的新基因,在国际基因库的输入号为GenBank AF109648.随后构建了pTrxFUS-PV242重组质粒,并在大肠杆菌GI724中获得融合蛋白TrxA/PV242的可溶性表达,采用离子交换层析法纯化表达蛋白,融合蛋白有纤维平板溶解活性.
從我國特有的雙胸蚓屬(Lumbricus bimastus)蚯蚓體內提取到一種有纖維蛋白平闆溶解活性的蛋白質,採用聚偏二氟乙烯膜(PVDF)微量測序法測得蛋白質的N耑氨基痠序列,依此設計簡併引物,通過RT-PCR穫得其對應cDNA.該cDNA全長888 bp,1～726位覈苷痠對應讀碼框架(ORF),編碼含242箇氨基痠的成熟肽.終止子(TAG)位于cDNA的727～729位,其餘覈苷痠序列為3′耑非編碼區.成熟肽命名為蚯蚓纖溶酶PV242.蛋白質預測得知蛋白質等電點為4.33,含組氨痠(His44)及絲氨痠 (Ser191)兩箇活性位點;蛋白質由兩箇結構域組成,錶麵有活性裂隙;該蛋白質屬絲氨痠蛋白酶超傢族胰蛋白酶類.經國際基因庫等多種查詢比較未見PV242基因的報道,為首次髮現的新基因,在國際基因庫的輸入號為GenBank AF109648.隨後構建瞭pTrxFUS-PV242重組質粒,併在大腸桿菌GI724中穫得融閤蛋白TrxA/PV242的可溶性錶達,採用離子交換層析法純化錶達蛋白,融閤蛋白有纖維平闆溶解活性.
종아국특유적쌍흉인속(Lumbricus bimastus)구인체내제취도일충유섬유단백평판용해활성적단백질,채용취편이불을희막(PVDF)미량측서법측득단백질적N단안기산서렬,의차설계간병인물,통과RT-PCR획득기대응cDNA.해cDNA전장888 bp,1～726위핵감산대응독마광가(ORF),편마함242개안기산적성숙태.종지자(TAG)위우cDNA적727～729위,기여핵감산서렬위3′단비편마구.성숙태명명위구인섬용매PV242.단백질예측득지단백질등전점위4.33,함조안산(His44)급사안산 (Ser191)량개활성위점;단백질유량개결구역조성,표면유활성렬극;해단백질속사안산단백매초가족이단백매류.경국제기인고등다충사순비교미견PV242기인적보도,위수차발현적신기인,재국제기인고적수입호위GenBank AF109648.수후구건료pTrxFUS-PV242중조질립,병재대장간균GI724중획득융합단백TrxA/PV242적가용성표체,채용리자교환층석법순화표체단백,융합단백유섬유평판용해활성.
