广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2004年
1期
41-43
,共3页
吴雪琼%张俊仙%张翠英%张妍%王安全%金关甫
吳雪瓊%張俊仙%張翠英%張妍%王安全%金關甫
오설경%장준선%장취영%장연%왕안전%금관보
抗原 katG 基因表达 血清学诊断 分支杆菌,结核
抗原 katG 基因錶達 血清學診斷 分支桿菌,結覈
항원 katG 기인표체 혈청학진단 분지간균,결핵
目的获得重组katG(简称rkatG)蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值.方法应用基因工程技术表达、纯化katG蛋白,通过Westem blotting分析其抗原性,分别以结核分支杆菌PPD或纯化的rkatG蛋白为抗原,通过ELISA方法及结核病一步法检测血清中抗结核抗体.结果重组质粒pET24b-katG 在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的28.2%～56.3%左右,分子质量约为80 000,Western blotting分析与抗结核分支杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性.纯化后的rkatG样品经SDSPAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为92.75%,每100 ml培养菌可获得28 mg左右的重组蛋白.以33例正常人血清的OD值+2 s为正常界限值,一步法的特异性和敏感性分别为87.9%(29/33),65.6%(21/32);PPD分别为93.9%(31/33),62.5%(20/32);rkatG分别为97.0%(32/33),15.2%(5/33).结论pET24b-katG大肠杆菌工程菌能以包涵体形式表达rkatG蛋白,该蛋白具有较高的抗原特异性,但检测抗结核抗体的灵敏度低.
目的穫得重組katG(簡稱rkatG)蛋白,研究其免疫學特性,評價其在結覈病血清學診斷中的價值.方法應用基因工程技術錶達、純化katG蛋白,通過Westem blotting分析其抗原性,分彆以結覈分支桿菌PPD或純化的rkatG蛋白為抗原,通過ELISA方法及結覈病一步法檢測血清中抗結覈抗體.結果重組質粒pET24b-katG 在大腸桿菌BL21(DE3)細胞內以包涵體形式錶達,錶達量佔菌體總蛋白的28.2%～56.3%左右,分子質量約為80 000,Western blotting分析與抗結覈分支桿菌多剋隆抗體具有良好的免疫反應性.純化後的rkatG樣品經SDSPAGE和光密度掃描分析錶明其純度約為92.75%,每100 ml培養菌可穫得28 mg左右的重組蛋白.以33例正常人血清的OD值+2 s為正常界限值,一步法的特異性和敏感性分彆為87.9%(29/33),65.6%(21/32);PPD分彆為93.9%(31/33),62.5%(20/32);rkatG分彆為97.0%(32/33),15.2%(5/33).結論pET24b-katG大腸桿菌工程菌能以包涵體形式錶達rkatG蛋白,該蛋白具有較高的抗原特異性,但檢測抗結覈抗體的靈敏度低.
목적획득중조katG(간칭rkatG)단백,연구기면역학특성,평개기재결핵병혈청학진단중적개치.방법응용기인공정기술표체、순화katG단백,통과Westem blotting분석기항원성,분별이결핵분지간균PPD혹순화적rkatG단백위항원,통과ELISA방법급결핵병일보법검측혈청중항결핵항체.결과중조질립pET24b-katG 재대장간균BL21(DE3)세포내이포함체형식표체,표체량점균체총단백적28.2%～56.3%좌우,분자질량약위80 000,Western blotting분석여항결핵분지간균다극륭항체구유량호적면역반응성.순화후적rkatG양품경SDSPAGE화광밀도소묘분석표명기순도약위92.75%,매100 ml배양균가획득28 mg좌우적중조단백.이33례정상인혈청적OD치+2 s위정상계한치,일보법적특이성화민감성분별위87.9%(29/33),65.6%(21/32);PPD분별위93.9%(31/33),62.5%(20/32);rkatG분별위97.0%(32/33),15.2%(5/33).결론pET24b-katG대장간균공정균능이포함체형식표체rkatG단백,해단백구유교고적항원특이성,단검측항결핵항체적령민도저.
