CAJ | 학술논문

采用SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,构建了家蝇(Musca domestica)的cDNA质粒文库.按TRIzol Reagent试剂盒的操作说明提取家蝇触角总RNA,以此为模板,通过PowerScriptTM反转录酶反转录合成第一链cDNA;再以第一链cDNA产物为模板,用LD-PCR合成cDNA双链.该cDNA产物经分级分离、连接和电转化,即得到家蝇触角cDNA原始文库,其滴度为6.3×108 cfu/mL.对原始文库进行扩增,取适量扩增文库稀释并涂平板,用PCR方法测得文库的重组率为91%,插入cDNA的平均长度为1.7 kb.随机挑取克隆提取质粒,5′端测定插入片段的核苷酸序列,克隆得到一个具有5′和3′非编码区的气味结合蛋白OBP3基因(MdomOBP3,GenBank登录号AY826189).测序分析表明,该基因具有气味结合蛋白的标志性结构域; 由推导的氨基酸序列同源性分析表明,该基因与已报道的双翅目昆虫气味结合蛋白OBP有较高的同源性.
채용SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)기술,구건료가승(Musca domestica)적cDNA질립문고.안TRIzol Reagent시제합적조작설명제취가승촉각총RNA,이차위모판,통과PowerScriptTM반전록매반전록합성제일련cDNA;재이제일련cDNA산물위모판,용LD-PCR합성cDNA쌍련.해cDNA산물경분급분리、련접화전전화,즉득도가승촉각cDNA원시문고,기적도위6.3×108 cfu/mL.대원시문고진행확증,취괄량확증문고희석병도평판,용PCR방법측득문고적중조솔위91%,삽입cDNA적평균장도위1.7 kb.수궤도취극륭제취질립,5′단측정삽입편단적핵감산서렬,극륭득도일개구유5′화3′비편마구적기미결합단백OBP3기인(MdomOBP3,GenBank등록호AY826189).측서분석표명,해기인구유기미결합단백적표지성결구역; 유추도적안기산서렬동원성분석표명,해기인여이보도적쌍시목곤충기미결합단백OBP유교고적동원성.