复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2007年
2期
302-306,312
,共6页
姜林娣%王汉洲%郭津生%赵凤娣%薛如意%王吉耀
薑林娣%王漢洲%郭津生%趙鳳娣%薛如意%王吉耀
강림제%왕한주%곽진생%조봉제%설여의%왕길요
关节炎%类风湿%环氧化酶%前列腺素E2%RNA干扰%成纤维细胞
關節炎%類風濕%環氧化酶%前列腺素E2%RNA榦擾%成纖維細胞
관절염%류풍습%배양화매%전렬선소E2%RNA간우%성섬유세포
目的 体外合成针对人环氧化酶-2(hCOX-2)的小分子干扰RNA(siRNA),并转染人人滑膜成纤维细胞,通过比较不同siRNA抑制COX-2 mRNA表达、COX-2蛋白合成以及下游产物PGE2水平,旨在确定特异性阻断人滑膜成纤维细胞COX-2的siRNA.方法 分离、培养和传代人类风湿关节炎(类风关)滑膜成纤维细胞.设计合成4条针对hCOX-2 mRNA siRNA(1#-4#siRNA),1条随机序列siRNA.设立1#-4#siRNA和随机序列siRNA组(NC)及未转染对照组(CTL组).应用Lipofect AMINE 2000将上述siRNA分别转染人滑膜成纤维细胞,4 h后各培养孔加入终浓度为100 nmol/L的佛波酯.转染36 h、48 h后,各组提取蛋白质和总RNA,应用RT-PCR检测hCOX-2 mRNA表达水平,通过Western Blot检测hCOX-2蛋白表达水平.采用ELISA方法检测各组上清液PGE2的水平.结果 转染36 h,PCR结果显示,CTL、NC、1#siRNA、2#RNA、3#RNA、4#siRNA、阳性对照HeLa细胞组hCOX-2 mRNA电泳条带密度值分别为1、0.72、0.3、0.25、0.4、0.04、2.1.Western Blot结果提示上述各组hCOX-2蛋白密度值分别为1、1.04、0.52、0.39、0.9、0和2.48.转染48 h后,各组hCOX-2蛋白条带密度值分别为0.05、0.52、0.51、0.9和0.15.转染24 h、48 h和72 h后,4#siRNA组培养上清液PGE2的水平较其他各组低.结论 4#siRNA能有效抑制人滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达和COX-2蛋白的合成,且上清液中PGE2水平最低,证实4#siRNA能特异性阻断COX-2在滑膜成纤维细胞表达.
目的 體外閤成針對人環氧化酶-2(hCOX-2)的小分子榦擾RNA(siRNA),併轉染人人滑膜成纖維細胞,通過比較不同siRNA抑製COX-2 mRNA錶達、COX-2蛋白閤成以及下遊產物PGE2水平,旨在確定特異性阻斷人滑膜成纖維細胞COX-2的siRNA.方法 分離、培養和傳代人類風濕關節炎(類風關)滑膜成纖維細胞.設計閤成4條針對hCOX-2 mRNA siRNA(1#-4#siRNA),1條隨機序列siRNA.設立1#-4#siRNA和隨機序列siRNA組(NC)及未轉染對照組(CTL組).應用Lipofect AMINE 2000將上述siRNA分彆轉染人滑膜成纖維細胞,4 h後各培養孔加入終濃度為100 nmol/L的彿波酯.轉染36 h、48 h後,各組提取蛋白質和總RNA,應用RT-PCR檢測hCOX-2 mRNA錶達水平,通過Western Blot檢測hCOX-2蛋白錶達水平.採用ELISA方法檢測各組上清液PGE2的水平.結果 轉染36 h,PCR結果顯示,CTL、NC、1#siRNA、2#RNA、3#RNA、4#siRNA、暘性對照HeLa細胞組hCOX-2 mRNA電泳條帶密度值分彆為1、0.72、0.3、0.25、0.4、0.04、2.1.Western Blot結果提示上述各組hCOX-2蛋白密度值分彆為1、1.04、0.52、0.39、0.9、0和2.48.轉染48 h後,各組hCOX-2蛋白條帶密度值分彆為0.05、0.52、0.51、0.9和0.15.轉染24 h、48 h和72 h後,4#siRNA組培養上清液PGE2的水平較其他各組低.結論 4#siRNA能有效抑製人滑膜成纖維細胞COX-2 mRNA錶達和COX-2蛋白的閤成,且上清液中PGE2水平最低,證實4#siRNA能特異性阻斷COX-2在滑膜成纖維細胞錶達.
목적 체외합성침대인배양화매-2(hCOX-2)적소분자간우RNA(siRNA),병전염인인활막성섬유세포,통과비교불동siRNA억제COX-2 mRNA표체、COX-2단백합성이급하유산물PGE2수평,지재학정특이성조단인활막성섬유세포COX-2적siRNA.방법 분리、배양화전대인류풍습관절염(류풍관)활막성섬유세포.설계합성4조침대hCOX-2 mRNA siRNA(1#-4#siRNA),1조수궤서렬siRNA.설립1#-4#siRNA화수궤서렬siRNA조(NC)급미전염대조조(CTL조).응용Lipofect AMINE 2000장상술siRNA분별전염인활막성섬유세포,4 h후각배양공가입종농도위100 nmol/L적불파지.전염36 h、48 h후,각조제취단백질화총RNA,응용RT-PCR검측hCOX-2 mRNA표체수평,통과Western Blot검측hCOX-2단백표체수평.채용ELISA방법검측각조상청액PGE2적수평.결과 전염36 h,PCR결과현시,CTL、NC、1#siRNA、2#RNA、3#RNA、4#siRNA、양성대조HeLa세포조hCOX-2 mRNA전영조대밀도치분별위1、0.72、0.3、0.25、0.4、0.04、2.1.Western Blot결과제시상술각조hCOX-2단백밀도치분별위1、1.04、0.52、0.39、0.9、0화2.48.전염48 h후,각조hCOX-2단백조대밀도치분별위0.05、0.52、0.51、0.9화0.15.전염24 h、48 h화72 h후,4#siRNA조배양상청액PGE2적수평교기타각조저.결론 4#siRNA능유효억제인활막성섬유세포COX-2 mRNA표체화COX-2단백적합성,차상청액중PGE2수평최저,증실4#siRNA능특이성조단COX-2재활막성섬유세포표체.
