CAJ | 학술논문

[目的]构建一个适于嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)的基因打靶载体,并分析转化四膜虫的特性.[方法]以嗜热四膜虫组蛋白H4-I基因作为启动子,利用H4-I基因的5′和3′侧翼区作为同源臂,并且保留H4-I基因编码区的起始密码子ATG和终止密码子TGA,中间嵌入巴龙霉素抗性标记基因neo,从而构建一个基因打靶载体.将该载体电击转化到嗜热四膜虫接合株体内,使其同源重组到四膜虫H4-I基因上.通过巴龙霉素抗性筛选、PCR扩增目的基因对抗性虫株进行鉴定.光学和电子显微镜观察抗性虫株形态变化.[结果]成功构建了一个适于嗜热四膜虫的基因打靶载体,将其电击转化到四膜虫体内,抗性虫株的生长速度明显高于普通四膜虫,显微镜观察抗性虫株形态变小,大约是正常形态的1/20～1/30,抗性虫株表面光滑,未见纤毛.[结论]利用基因打靶载体将neo基因定向整合到四膜虫H4-Ⅰ基因内部,为今后在嗜热四膜虫体内表达外源蛋白奠定了基础.
[목적]구건일개괄우기열사막충(Tetrahymena thermophila)적기인타파재체,병분석전화사막충적특성.[방법]이기열사막충조단백H4-I기인작위계동자,이용H4-I기인적5′화3′측익구작위동원비,병차보류H4-I기인편마구적기시밀마자ATG화종지밀마자TGA,중간감입파룡매소항성표기기인neo,종이구건일개기인타파재체.장해재체전격전화도기열사막충접합주체내,사기동원중조도사막충H4-I기인상.통과파룡매소항성사선、PCR확증목적기인대항성충주진행감정.광학화전자현미경관찰항성충주형태변화.[결과]성공구건료일개괄우기열사막충적기인타파재체,장기전격전화도사막충체내,항성충주적생장속도명현고우보통사막충,현미경관찰항성충주형태변소,대약시정상형태적1/20～1/30,항성충주표면광활,미견섬모.[결론]이용기인타파재체장neo기인정향정합도사막충H4-Ⅰ기인내부,위금후재기열사막충체내표체외원단백전정료기출.