南京大学学报(自然科学版)
南京大學學報(自然科學版)
남경대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF NANJING UNIVERSITY
2004年
2期
164-169
,共6页
郭志刚%张巍%陈新园%傅一工%孙自勇%刘建宁
郭誌剛%張巍%陳新園%傅一工%孫自勇%劉建寧
곽지강%장외%진신완%부일공%손자용%류건저
BACE%rhBACE%rh-proBACE%β分泌酶%阿尔茨海默病
BACE%rhBACE%rh-proBACE%β分泌酶%阿爾茨海默病
BACE%rhBACE%rh-proBACE%β분비매%아이자해묵병
将重组人酸性蛋白水解酶原(rh-proBACE)基因克隆到原核表达载体pET28a质粒中,构建了pET28a-rh-proBACE重组表达载体,并在大肠杆菌菌株Rosetta中进行表达.包涵体中的表达产物溶于6 mol/L盐酸胍,经Ni-Sepharose亲和层析纯化后,得到高纯度的rh-proBACE蛋白,将此蛋白在复性液中重新折叠后,于酸性条件(pH 4.5)下激活,切去酶原序列,产生有活性的rhBACE蛋白,并利用人工合成多肽底物(BAS-131)测定其活性.
將重組人痠性蛋白水解酶原(rh-proBACE)基因剋隆到原覈錶達載體pET28a質粒中,構建瞭pET28a-rh-proBACE重組錶達載體,併在大腸桿菌菌株Rosetta中進行錶達.包涵體中的錶達產物溶于6 mol/L鹽痠胍,經Ni-Sepharose親和層析純化後,得到高純度的rh-proBACE蛋白,將此蛋白在複性液中重新摺疊後,于痠性條件(pH 4.5)下激活,切去酶原序列,產生有活性的rhBACE蛋白,併利用人工閤成多肽底物(BAS-131)測定其活性.
장중조인산성단백수해매원(rh-proBACE)기인극륭도원핵표체재체pET28a질립중,구건료pET28a-rh-proBACE중조표체재체,병재대장간균균주Rosetta중진행표체.포함체중적표체산물용우6 mol/L염산고,경Ni-Sepharose친화층석순화후,득도고순도적rh-proBACE단백,장차단백재복성액중중신절첩후,우산성조건(pH 4.5)하격활,절거매원서렬,산생유활성적rhBACE단백,병이용인공합성다태저물(BAS-131)측정기활성.
