华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2009年
3期
281-285
,共5页
沈建英%徐桂香%左斌%甘辉%肖娟娟%张敏海%汪薇曦%李宏莲
瀋建英%徐桂香%左斌%甘輝%肖娟娟%張敏海%汪薇晞%李宏蓮
침건영%서계향%좌빈%감휘%초연연%장민해%왕미희%리굉련
阿尔茨海默病%tau蛋白%磷酸酯酶PP-2A%细胞凋亡
阿爾茨海默病%tau蛋白%燐痠酯酶PP-2A%細胞凋亡
아이자해묵병%tau단백%린산지매PP-2A%세포조망
目的 探讨磷酸酯酶活性降低致tau过度磷酸化与细胞凋亡的关系.方法 稳定表达人tau eDNA的鼠成神经瘤细胞(N2a/tau)分3组.对照组不处理;十字孢碱(staurosporine,STP,凋亡诱导剂)处理6 h为STP组;用磷酸酯酶PP-2A的抑制剂冈田酸(okadaic acid,OA)处理4 h,再用STP处理6 h为OA+STP组.流式细胞仪检测凋亡率,免疫印迹检测Ser396位点磷酸化tau(Ser396 p-tau)和总tau的表达,免疫荧光双标检测Ser396 p-tau的阳性产物与活化的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase-3)阳性产物的共定位关系.结果 ①凋亡率:对照组为(4.37±1.47)%,STP组为(19.84±3.25)%,OA+STP组为(12.12±2.46)%;②免疫印迹:OA+STP组Ser396 p-tau的表达明显高于另两组,总tau表达组间无差异;③免疫荧光双标:进一步印证免疫印迹结果,且3组均显示活化的Caspase-3和Ser396 p-tau阳性产物大多不共定位于相同细胞.结论 PP-2A活性降低所致tau Ser396位点的过度磷酸化可抑制细胞凋亡,结合前期的实验进一步明确特殊位点过度磷酸化的tau可抑制细胞进入快速的凋亡程序.
目的 探討燐痠酯酶活性降低緻tau過度燐痠化與細胞凋亡的關繫.方法 穩定錶達人tau eDNA的鼠成神經瘤細胞(N2a/tau)分3組.對照組不處理;十字孢堿(staurosporine,STP,凋亡誘導劑)處理6 h為STP組;用燐痠酯酶PP-2A的抑製劑岡田痠(okadaic acid,OA)處理4 h,再用STP處理6 h為OA+STP組.流式細胞儀檢測凋亡率,免疫印跡檢測Ser396位點燐痠化tau(Ser396 p-tau)和總tau的錶達,免疫熒光雙標檢測Ser396 p-tau的暘性產物與活化的半胱氨痠蛋白酶(Cleaved Caspase-3)暘性產物的共定位關繫.結果 ①凋亡率:對照組為(4.37±1.47)%,STP組為(19.84±3.25)%,OA+STP組為(12.12±2.46)%;②免疫印跡:OA+STP組Ser396 p-tau的錶達明顯高于另兩組,總tau錶達組間無差異;③免疫熒光雙標:進一步印證免疫印跡結果,且3組均顯示活化的Caspase-3和Ser396 p-tau暘性產物大多不共定位于相同細胞.結論 PP-2A活性降低所緻tau Ser396位點的過度燐痠化可抑製細胞凋亡,結閤前期的實驗進一步明確特殊位點過度燐痠化的tau可抑製細胞進入快速的凋亡程序.
목적 탐토린산지매활성강저치tau과도린산화여세포조망적관계.방법 은정표체인tau eDNA적서성신경류세포(N2a/tau)분3조.대조조불처리;십자포감(staurosporine,STP,조망유도제)처리6 h위STP조;용린산지매PP-2A적억제제강전산(okadaic acid,OA)처리4 h,재용STP처리6 h위OA+STP조.류식세포의검측조망솔,면역인적검측Ser396위점린산화tau(Ser396 p-tau)화총tau적표체,면역형광쌍표검측Ser396 p-tau적양성산물여활화적반광안산단백매(Cleaved Caspase-3)양성산물적공정위관계.결과 ①조망솔:대조조위(4.37±1.47)%,STP조위(19.84±3.25)%,OA+STP조위(12.12±2.46)%;②면역인적:OA+STP조Ser396 p-tau적표체명현고우령량조,총tau표체조간무차이;③면역형광쌍표:진일보인증면역인적결과,차3조균현시활화적Caspase-3화Ser396 p-tau양성산물대다불공정위우상동세포.결론 PP-2A활성강저소치tau Ser396위점적과도린산화가억제세포조망,결합전기적실험진일보명학특수위점과도린산화적tau가억제세포진입쾌속적조망정서.
