微生物学免疫学进展
微生物學免疫學進展
미생물학면역학진전
PROGRESS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2003年
1期
7-10
,共4页
赵月峨%于曼%邓永强%杨保安%吕富双%祝庆余%秦鄂德
趙月峨%于曼%鄧永彊%楊保安%呂富雙%祝慶餘%秦鄂德
조월아%우만%산영강%양보안%려부쌍%축경여%진악덕
西部马脑炎病毒%半套式RT-PCR%基因组序列
西部馬腦炎病毒%半套式RT-PCR%基因組序列
서부마뇌염병독%반투식RT-PCR%기인조서렬
为进一步提高RT-PCR检测西部马脑炎病毒(WEE)病毒基因组方法的敏感性,采用半套式PCR扩增病毒基因组特异序列.首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA,然后以此cDNA为模板,进行扩增.对扩增后电泳检查无可见DNA条带的产物进行半套式PCR;与此同时对扩增的循环数、Mg++浓度和退火温度等条件进行了优化,以进一步提高扩增的特异性.结果第一轮PCR未扩出特异性片段的WEE病毒稀释度,其半套式扩增出特定大小的DNA产物;同时优化的条件提高了扩增产物的特异性.扩增产物约为190bp的单一DNA片段,其大小与预期的相一致.结果表明采用半套式RT-PCR方法检测WEE病毒的基因组序列的敏感性可提高100倍以上.
為進一步提高RT-PCR檢測西部馬腦炎病毒(WEE)病毒基因組方法的敏感性,採用半套式PCR擴增病毒基因組特異序列.首先採用逆轉錄法將病毒基因組RNA逆轉錄為cDNA,然後以此cDNA為模闆,進行擴增.對擴增後電泳檢查無可見DNA條帶的產物進行半套式PCR;與此同時對擴增的循環數、Mg++濃度和退火溫度等條件進行瞭優化,以進一步提高擴增的特異性.結果第一輪PCR未擴齣特異性片段的WEE病毒稀釋度,其半套式擴增齣特定大小的DNA產物;同時優化的條件提高瞭擴增產物的特異性.擴增產物約為190bp的單一DNA片段,其大小與預期的相一緻.結果錶明採用半套式RT-PCR方法檢測WEE病毒的基因組序列的敏感性可提高100倍以上.
위진일보제고RT-PCR검측서부마뇌염병독(WEE)병독기인조방법적민감성,채용반투식PCR확증병독기인조특이서렬.수선채용역전록법장병독기인조RNA역전록위cDNA,연후이차cDNA위모판,진행확증.대확증후전영검사무가견DNA조대적산물진행반투식PCR;여차동시대확증적순배수、Mg++농도화퇴화온도등조건진행료우화,이진일보제고확증적특이성.결과제일륜PCR미확출특이성편단적WEE병독희석도,기반투식확증출특정대소적DNA산물;동시우화적조건제고료확증산물적특이성.확증산물약위190bp적단일DNA편단,기대소여예기적상일치.결과표명채용반투식RT-PCR방법검측WEE병독적기인조서렬적민감성가제고100배이상.
