CAJ | 학술논문

利用PCR技术扩增出带有凝血酶Xa因子切割位点的天蚕素蜂毒素杂合肽和aFGF的融合基因,插入大肠杆菌表达载体pET-3c中,构建出表达质粒pET-aF-CM,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,氨苄青霉素抗性筛选重组转化子.IPTG诱导4h后,以包涵体形式表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的17%.将包涵体溶解后透析复性,并利用肝素亲和层析纯化,得到电泳纯的融合蛋白.Western blot分析表明,该蛋白能与aFGF抗体产生免疫反应.MTT法检测显示,融合蛋白具有促3T3Bal/b细胞分裂活性,其比活为1.471×106IU/mg.利用凝血酶Xa因子裂解融合蛋白,可以获得抗菌肽和含凝血酶Xa因子裂解序列的aFGF蛋白.分子筛回收含杂合抗菌肽,抑菌活性检测表明其对大肠杆菌K12D31具有明显抑菌活性.微量稀释法检测结果表明,回收的抗菌肽对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌K12D31、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌的MIC分别达6.25μg/ml、10μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml、0.625μg/ml和5μg/ml.
이용PCR기술확증출대유응혈매Xa인자절할위점적천잠소봉독소잡합태화aFGF적융합기인,삽입대장간균표체재체pET-3c중,구건출표체질립pET-aF-CM,병전화지대장간균BL21(DE3)중,안변청매소항성사선중조전화자.IPTG유도4h후,이포함체형식표체적융합단백약점균체총단백적17%.장포함체용해후투석복성,병이용간소친화층석순화,득도전영순적융합단백.Western blot분석표명,해단백능여aFGF항체산생면역반응.MTT법검측현시,융합단백구유촉3T3Bal/b세포분렬활성,기비활위1.471×106IU/mg.이용응혈매Xa인자렬해융합단백,가이획득항균태화함응혈매Xa인자렬해서렬적aFGF단백.분자사회수함잡합항균태,억균활성검측표명기대대장간균K12D31구유명현억균활성.미량희석법검측결과표명,회수적항균태대대장간균DH5α、대장간균K12D31、사문씨균、금황색포도구균、고초아포간균화록농간균적MIC분별체6.25μg/ml、10μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml、0.625μg/ml화5μg/ml.