华西口腔医学杂志
華西口腔醫學雜誌
화서구강의학잡지
WEST CHINA JOURNAL OF STOMATOLOGY
2006年
3期
195-198
,共4页
郑培惠%魏奉才%晋国营%单秀丽%孙树阳
鄭培惠%魏奉纔%晉國營%單秀麗%孫樹暘
정배혜%위봉재%진국영%단수려%손수양
脂肪间充质干细胞%骨形态发生蛋白-2%腺病毒%基因转染
脂肪間充質榦細胞%骨形態髮生蛋白-2%腺病毒%基因轉染
지방간충질간세포%골형태발생단백-2%선병독%기인전염
目的探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2(Ad-hBMP-2)基因转染大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)的可行性及其成骨特性.方法取4周龄SD大鼠腹股沟的脂肪组织,经体外分离培养的方法获得ADSCs,分别转染以腺病毒为载体的绿色荧光蛋白(Ad-GFP)基因和Ad-hBMP-2基因.用荧光显微镜每隔12 h观察转染Ad-GFP的细胞,并确定转染率,观察其形态变化,绘制生长曲线;利用免疫细胞化学法对转染Ad-hBMP-2的细胞作碱性磷酸酶(ALP)染色,用免疫细胞化学法作骨钙素(OC)检测确定成骨活性,Western blot法检测hBMP-2的表达.结果12 h后荧光显微镜观察转染Ad-GFP的细胞,有52%的阳性表达细胞,48 h后转染率达95%;转染Ad-hBMP-2后倍增时间延长,ALP、OC检测为阳性表达,hBMP-2蛋白转染后48 h为阳性表达,并持续至第5代.结论ADSCs可以作为腺病毒转染的载体,转染Ad-hBMP-2基因后有明显的成骨作用,可以作为骨组织工程的种子细胞.
目的探討腺病毒介導的人骨形態髮生蛋白-2(Ad-hBMP-2)基因轉染大鼠脂肪間充質榦細胞(ADSCs)的可行性及其成骨特性.方法取4週齡SD大鼠腹股溝的脂肪組織,經體外分離培養的方法穫得ADSCs,分彆轉染以腺病毒為載體的綠色熒光蛋白(Ad-GFP)基因和Ad-hBMP-2基因.用熒光顯微鏡每隔12 h觀察轉染Ad-GFP的細胞,併確定轉染率,觀察其形態變化,繪製生長麯線;利用免疫細胞化學法對轉染Ad-hBMP-2的細胞作堿性燐痠酶(ALP)染色,用免疫細胞化學法作骨鈣素(OC)檢測確定成骨活性,Western blot法檢測hBMP-2的錶達.結果12 h後熒光顯微鏡觀察轉染Ad-GFP的細胞,有52%的暘性錶達細胞,48 h後轉染率達95%;轉染Ad-hBMP-2後倍增時間延長,ALP、OC檢測為暘性錶達,hBMP-2蛋白轉染後48 h為暘性錶達,併持續至第5代.結論ADSCs可以作為腺病毒轉染的載體,轉染Ad-hBMP-2基因後有明顯的成骨作用,可以作為骨組織工程的種子細胞.
목적탐토선병독개도적인골형태발생단백-2(Ad-hBMP-2)기인전염대서지방간충질간세포(ADSCs)적가행성급기성골특성.방법취4주령SD대서복고구적지방조직,경체외분리배양적방법획득ADSCs,분별전염이선병독위재체적록색형광단백(Ad-GFP)기인화Ad-hBMP-2기인.용형광현미경매격12 h관찰전염Ad-GFP적세포,병학정전염솔,관찰기형태변화,회제생장곡선;이용면역세포화학법대전염Ad-hBMP-2적세포작감성린산매(ALP)염색,용면역세포화학법작골개소(OC)검측학정성골활성,Western blot법검측hBMP-2적표체.결과12 h후형광현미경관찰전염Ad-GFP적세포,유52%적양성표체세포,48 h후전염솔체95%;전염Ad-hBMP-2후배증시간연장,ALP、OC검측위양성표체,hBMP-2단백전염후48 h위양성표체,병지속지제5대.결론ADSCs가이작위선병독전염적재체,전염Ad-hBMP-2기인후유명현적성골작용,가이작위골조직공정적충자세포.
