化学与生物工程
化學與生物工程
화학여생물공정
CHEMISTRY & BIOENGINEERING
2010年
12期
53-55,68
,共4页
郭成栓%欧阳蒲月%崔堂兵%郭勇
郭成栓%歐暘蒲月%崔堂兵%郭勇
곽성전%구양포월%최당병%곽용
β-1,4-葡聚糖内切酶%大肠杆菌%短小芽孢杆菌%克隆%表达
β-1,4-葡聚糖內切酶%大腸桿菌%短小芽孢桿菌%剋隆%錶達
β-1,4-포취당내절매%대장간균%단소아포간균%극륭%표체
从一株产碱性纤维素酶的短小芽孢杆菌H12中克隆了编码β-1,4-葡聚糖内切酶的基因,对其基因序列及其酶的结构域进行了分析预测,同时将该酶的基因构建于大肠杆菌表达载体pET20b中,获得重组表达载体pET20b-EglA,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行表达.结果表明,该基因大小为1980 bp,共编码659个氨基酸;对β-1,4-葡聚糖内切酶结构域分析表明,该酶由两个不连续的结构域组成,其一为N-端催化结构域,由糖基水解酶家族9组成,其二为C-端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成;平板实验结果表明,β-1,4-葡聚糖内切酶基因在重组大肠杆菌中得到了良好的分泌表达;SDS-PAGE电泳图谱表明该酶的分子大小约为73 kDa.
從一株產堿性纖維素酶的短小芽孢桿菌H12中剋隆瞭編碼β-1,4-葡聚糖內切酶的基因,對其基因序列及其酶的結構域進行瞭分析預測,同時將該酶的基因構建于大腸桿菌錶達載體pET20b中,穫得重組錶達載體pET20b-EglA,將其轉化至大腸桿菌BL21(DE3)菌株中進行錶達.結果錶明,該基因大小為1980 bp,共編碼659箇氨基痠;對β-1,4-葡聚糖內切酶結構域分析錶明,該酶由兩箇不連續的結構域組成,其一為N-耑催化結構域,由糖基水解酶傢族9組成,其二為C-耑底物結閤結構域,由碳水化閤物綁定結構域傢族3組成;平闆實驗結果錶明,β-1,4-葡聚糖內切酶基因在重組大腸桿菌中得到瞭良好的分泌錶達;SDS-PAGE電泳圖譜錶明該酶的分子大小約為73 kDa.
종일주산감성섬유소매적단소아포간균H12중극륭료편마β-1,4-포취당내절매적기인,대기기인서렬급기매적결구역진행료분석예측,동시장해매적기인구건우대장간균표체재체pET20b중,획득중조표체재체pET20b-EglA,장기전화지대장간균BL21(DE3)균주중진행표체.결과표명,해기인대소위1980 bp,공편마659개안기산;대β-1,4-포취당내절매결구역분석표명,해매유량개불련속적결구역조성,기일위N-단최화결구역,유당기수해매가족9조성,기이위C-단저물결합결구역,유탄수화합물방정결구역가족3조성;평판실험결과표명,β-1,4-포취당내절매기인재중조대장간균중득도료량호적분비표체;SDS-PAGE전영도보표명해매적분자대소약위73 kDa.
