动物学报
動物學報
동물학보
ACTA ZOOLOGICA SINICA
2006年
4期
774-779
,共6页
李恩中%李德雪%张世庆%王常勇%张学明%王海滨%鲁景艳%王静
李恩中%李德雪%張世慶%王常勇%張學明%王海濱%魯景豔%王靜
리은중%리덕설%장세경%왕상용%장학명%왕해빈%로경염%왕정
小鼠%精原干细胞%Sertoli细胞%饲养层
小鼠%精原榦細胞%Sertoli細胞%飼養層
소서%정원간세포%Sertoli세포%사양층
为探索精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)体外自增殖的条件以及SSCs体外快速扩增的方法,以6-8日龄昆明乳鼠为材料,分离小鼠睾丸细胞,采用Percoll梯度离心法富集SSCs;以经丝裂霉素C处理的Sertoli细胞作饲养层,以DMEM为基本培养基,加入5%胎牛血清和103 u/ml的白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF),体外培养SSCs;运用免疫荧光技术,以SSCs特异性表面分子Thy-1为标志,对原代培养20 d和传代培养14 d的细胞进行鉴定.该培养体系下,SSCs贴壁时间为6 h-9 h,48 h后可见细胞分裂,迅速增殖出现在接种12 d以后.接种后第20 d形成数十至上百个细胞的细胞团,细胞总数比接种时增加了45-245倍,100倍显微镜下观察可见,单位视野内细胞团数为26±4个.传代后细胞增殖较快.原代培养20 d和传代培养14 d的细胞均为Thy-1阳性;而传代20 d后,细胞周缘不整,有伪足出现,呈现出死亡迹象.该培养条比较适合SSCs短期快速增殖[动物学报 52(4):774-779,2006].
為探索精原榦細胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)體外自增殖的條件以及SSCs體外快速擴增的方法,以6-8日齡昆明乳鼠為材料,分離小鼠睪汍細胞,採用Percoll梯度離心法富集SSCs;以經絲裂黴素C處理的Sertoli細胞作飼養層,以DMEM為基本培養基,加入5%胎牛血清和103 u/ml的白血病抑製因子(Leukemia inhibitory factor,LIF),體外培養SSCs;運用免疫熒光技術,以SSCs特異性錶麵分子Thy-1為標誌,對原代培養20 d和傳代培養14 d的細胞進行鑒定.該培養體繫下,SSCs貼壁時間為6 h-9 h,48 h後可見細胞分裂,迅速增殖齣現在接種12 d以後.接種後第20 d形成數十至上百箇細胞的細胞糰,細胞總數比接種時增加瞭45-245倍,100倍顯微鏡下觀察可見,單位視野內細胞糰數為26±4箇.傳代後細胞增殖較快.原代培養20 d和傳代培養14 d的細胞均為Thy-1暘性;而傳代20 d後,細胞週緣不整,有偽足齣現,呈現齣死亡跡象.該培養條比較適閤SSCs短期快速增殖[動物學報 52(4):774-779,2006].
위탐색정원간세포(Spermatogonial stem cells,SSCs)체외자증식적조건이급SSCs체외쾌속확증적방법,이6-8일령곤명유서위재료,분리소서고환세포,채용Percoll제도리심법부집SSCs;이경사렬매소C처리적Sertoli세포작사양층,이DMEM위기본배양기,가입5%태우혈청화103 u/ml적백혈병억제인자(Leukemia inhibitory factor,LIF),체외배양SSCs;운용면역형광기술,이SSCs특이성표면분자Thy-1위표지,대원대배양20 d화전대배양14 d적세포진행감정.해배양체계하,SSCs첩벽시간위6 h-9 h,48 h후가견세포분렬,신속증식출현재접충12 d이후.접충후제20 d형성수십지상백개세포적세포단,세포총수비접충시증가료45-245배,100배현미경하관찰가견,단위시야내세포단수위26±4개.전대후세포증식교쾌.원대배양20 d화전대배양14 d적세포균위Thy-1양성;이전대20 d후,세포주연불정,유위족출현,정현출사망적상.해배양조비교괄합SSCs단기쾌속증식[동물학보 52(4):774-779,2006].
