CAJ | 학술논문

目的:将猪小肠黏膜下基质与猪髋动脉内皮细胞的复合培养,证实小肠黏膜下基质是否可以成为组织工程化血管的良好载体材料.方法:实验于2005-09/2006-01 在同济大学生命科学与技术学院生物医学工程研究所完成了猪小肠黏膜下基质的制备与处理,在复旦大学医学院附属中山医院肿瘤中心完成了猪小肠黏膜下基质的射线照射及消毒,在同济大学生命科学与技术学院实验室完成了猪髋动脉内皮细胞与猪小肠黏膜下基质的复合培养.实验材料:猪小肠黏膜下基质取自屠宰场获取的新鲜家猪空肠,猪髋动脉内皮细胞(PIEC,中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库).实验分组:分为猪髋动脉内皮细胞单独培养组与猪小肠黏膜下基质-猪髋动脉内皮细胞复合培养组.实验方法:①小肠黏膜下基质采用物理和化学方法处理.②猪髋动脉内皮细胞单独培养.③猪小肠黏膜下基质-猪髋动脉内皮细胞复合培养.实验评估:采用倒置相差显微镜观察细胞的黏附和生长,猪小肠黏膜下基质的组织结构;测定单纯培养猪髋动脉内皮细胞和猪小肠黏膜下基质-猪髋动脉内皮细胞复合培养细胞的生长曲线,每日取3孔培养细胞经消化后细胞计数,取其均值,总共8日;以评价猪小肠黏膜下基质与猪髋动脉内皮细胞的细胞相容性.结果:①小肠黏膜下层表面形态:猪小肠黏膜下基质为浅白色薄膜状,厚度约80μm,光镜下可见处理后膜的上下两侧结构不同,一面较粗糙,孔径较大,用于细胞种植,另一面较平坦.单经物理方法处理后的猪小肠黏膜下基质表面有大量残留的细胞碎屑,再行化学处理后基质表面无细胞碎屑残留,胶原纤维未受损.②单独培养与复合培养的猪髋动脉内皮细胞形态对比:倒置显微镜观察,猪小肠黏膜下基质与猪髋动脉内皮细胞复合培养接种细胞24 h贴壁,第1～4天时细胞增殖不明显,第5天有较多细胞直接贴附于材料边缘,随时间延长,猪髋动脉内皮细胞在猪小肠黏膜下基质表面黏附生长良好,细胞均匀分布于基质,细胞形态多为梭形及多角形.与猪髋动脉内皮细胞单独培养细胞相比,伪足不明显,细胞形态也相对规则.③细胞生长曲线:复合培养组的细胞计数前4 d较单纯培养组少,第5天后时细胞计数高于单纯培养组,复合培养组在接种的后1 d数量最少,两组细胞计数均在最后1 d达到最大值.结论:猪髋动脉内皮细胞可在猪小肠黏膜下基质上黏附生长,猪小肠黏膜下基质可促进猪髋动脉内皮细胞的增殖,猪小肠黏膜下基质有良好的细胞相容性,其孔径、结构有助于猪髋动脉内皮细胞的黏附和生长,是良好的组织工程生物衍生材料. 目的:將豬小腸黏膜下基質與豬髖動脈內皮細胞的複閤培養,證實小腸黏膜下基質是否可以成為組織工程化血管的良好載體材料.方法:實驗于2005-09/2006-01 在同濟大學生命科學與技術學院生物醫學工程研究所完成瞭豬小腸黏膜下基質的製備與處理,在複旦大學醫學院附屬中山醫院腫瘤中心完成瞭豬小腸黏膜下基質的射線照射及消毒,在同濟大學生命科學與技術學院實驗室完成瞭豬髖動脈內皮細胞與豬小腸黏膜下基質的複閤培養.實驗材料:豬小腸黏膜下基質取自屠宰場穫取的新鮮傢豬空腸,豬髖動脈內皮細胞(PIEC,中國科學院上海細胞生物學研究所細胞庫).實驗分組:分為豬髖動脈內皮細胞單獨培養組與豬小腸黏膜下基質-豬髖動脈內皮細胞複閤培養組.實驗方法:①小腸黏膜下基質採用物理和化學方法處理.②豬髖動脈內皮細胞單獨培養.③豬小腸黏膜下基質-豬髖動脈內皮細胞複閤培養.實驗評估:採用倒置相差顯微鏡觀察細胞的黏附和生長,豬小腸黏膜下基質的組織結構;測定單純培養豬髖動脈內皮細胞和豬小腸黏膜下基質-豬髖動脈內皮細胞複閤培養細胞的生長麯線,每日取3孔培養細胞經消化後細胞計數,取其均值,總共8日;以評價豬小腸黏膜下基質與豬髖動脈內皮細胞的細胞相容性.結果:①小腸黏膜下層錶麵形態:豬小腸黏膜下基質為淺白色薄膜狀,厚度約80μm,光鏡下可見處理後膜的上下兩側結構不同,一麵較粗糙,孔徑較大,用于細胞種植,另一麵較平坦.單經物理方法處理後的豬小腸黏膜下基質錶麵有大量殘留的細胞碎屑,再行化學處理後基質錶麵無細胞碎屑殘留,膠原纖維未受損.②單獨培養與複閤培養的豬髖動脈內皮細胞形態對比:倒置顯微鏡觀察,豬小腸黏膜下基質與豬髖動脈內皮細胞複閤培養接種細胞24 h貼壁,第1～4天時細胞增殖不明顯,第5天有較多細胞直接貼附于材料邊緣,隨時間延長,豬髖動脈內皮細胞在豬小腸黏膜下基質錶麵黏附生長良好,細胞均勻分佈于基質,細胞形態多為梭形及多角形.與豬髖動脈內皮細胞單獨培養細胞相比,偽足不明顯,細胞形態也相對規則.③細胞生長麯線:複閤培養組的細胞計數前4 d較單純培養組少,第5天後時細胞計數高于單純培養組,複閤培養組在接種的後1 d數量最少,兩組細胞計數均在最後1 d達到最大值.結論:豬髖動脈內皮細胞可在豬小腸黏膜下基質上黏附生長,豬小腸黏膜下基質可促進豬髖動脈內皮細胞的增殖,豬小腸黏膜下基質有良好的細胞相容性,其孔徑、結構有助于豬髖動脈內皮細胞的黏附和生長,是良好的組織工程生物衍生材料.
목적:장저소장점막하기질여저관동맥내피세포적복합배양,증실소장점막하기질시부가이성위조직공정화혈관적량호재체재료.방법:실험우2005-09/2006-01 재동제대학생명과학여기술학원생물의학공정연구소완성료저소장점막하기질적제비여처리,재복단대학의학원부속중산의원종류중심완성료저소장점막하기질적사선조사급소독,재동제대학생명과학여기술학원실험실완성료저관동맥내피세포여저소장점막하기질적복합배양.실험재료:저소장점막하기질취자도재장획취적신선가저공장,저관동맥내피세포(PIEC,중국과학원상해세포생물학연구소세포고).실험분조:분위저관동맥내피세포단독배양조여저소장점막하기질-저관동맥내피세포복합배양조.실험방법:①소장점막하기질채용물리화화학방법처리.②저관동맥내피세포단독배양.③저소장점막하기질-저관동맥내피세포복합배양.실험평고:채용도치상차현미경관찰세포적점부화생장,저소장점막하기질적조직결구;측정단순배양저관동맥내피세포화저소장점막하기질-저관동맥내피세포복합배양세포적생장곡선,매일취3공배양세포경소화후세포계수,취기균치,총공8일;이평개저소장점막하기질여저관동맥내피세포적세포상용성.결과:①소장점막하층표면형태:저소장점막하기질위천백색박막상,후도약80μm,광경하가견처리후막적상하량측결구불동,일면교조조,공경교대,용우세포충식,령일면교평탄.단경물리방법처리후적저소장점막하기질표면유대량잔류적세포쇄설,재행화학처리후기질표면무세포쇄설잔류,효원섬유미수손.②단독배양여복합배양적저관동맥내피세포형태대비:도치현미경관찰,저소장점막하기질여저관동맥내피세포복합배양접충세포24 h첩벽,제1～4천시세포증식불명현,제5천유교다세포직접첩부우재료변연,수시간연장,저관동맥내피세포재저소장점막하기질표면점부생장량호,세포균균분포우기질,세포형태다위사형급다각형.여저관동맥내피세포단독배양세포상비,위족불명현,세포형태야상대규칙.③세포생장곡선:복합배양조적세포계수전4 d교단순배양조소,제5천후시세포계수고우단순배양조,복합배양조재접충적후1 d수량최소,량조세포계수균재최후1 d체도최대치.결론:저관동맥내피세포가재저소장점막하기질상점부생장,저소장점막하기질가촉진저관동맥내피세포적증식,저소장점막하기질유량호적세포상용성,기공경、결구유조우저관동맥내피세포적점부화생장,시량호적조직공정생물연생재료.