生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2001年
1期
68-72
,共5页
产朊假丝酵母%尿酸氧化酶%基因克隆和表达%尿酸分析
產朊假絲酵母%尿痠氧化酶%基因剋隆和錶達%尿痠分析
산원가사효모%뇨산양화매%기인극륭화표체%뇨산분석
克隆了产朊假丝酵母(Candidautilis)AS2.117尿酸氧化酶(UrateOxidase,Uricase,EC1.733)的基因.将此基因插入原核表达质粒pET21a后转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高表达的重组转化子菌株.经IPTG诱导,重组尿酸酶基因表达量可达菌体可溶性蛋白的40%.重组尿酸氧化酶为有酶活性的可溶蛋白.Western印迹分析证实表达产物有免疫学活性.经DEAEDE52纤维素离子交换柱层析纯化,目的蛋白纯度可达95%.重组蛋白和天然蛋白的理化特征比较证明重组蛋白的热稳定性有较大提高.酶盒配制和临床应用实验表明重组蛋白可代替天然蛋白进行临床血清尿酸的分析.
剋隆瞭產朊假絲酵母(Candidautilis)AS2.117尿痠氧化酶(UrateOxidase,Uricase,EC1.733)的基因.將此基因插入原覈錶達質粒pET21a後轉化大腸桿菌BL21(DE3),穫得高錶達的重組轉化子菌株.經IPTG誘導,重組尿痠酶基因錶達量可達菌體可溶性蛋白的40%.重組尿痠氧化酶為有酶活性的可溶蛋白.Western印跡分析證實錶達產物有免疫學活性.經DEAEDE52纖維素離子交換柱層析純化,目的蛋白純度可達95%.重組蛋白和天然蛋白的理化特徵比較證明重組蛋白的熱穩定性有較大提高.酶盒配製和臨床應用實驗錶明重組蛋白可代替天然蛋白進行臨床血清尿痠的分析.
극륭료산원가사효모(Candidautilis)AS2.117뇨산양화매(UrateOxidase,Uricase,EC1.733)적기인.장차기인삽입원핵표체질립pET21a후전화대장간균BL21(DE3),획득고표체적중조전화자균주.경IPTG유도,중조뇨산매기인표체량가체균체가용성단백적40%.중조뇨산양화매위유매활성적가용단백.Western인적분석증실표체산물유면역학활성.경DEAEDE52섬유소리자교환주층석순화,목적단백순도가체95%.중조단백화천연단백적이화특정비교증명중조단백적열은정성유교대제고.매합배제화림상응용실험표명중조단백가대체천연단백진행림상혈청뇨산적분석.
