中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2006年
7期
617-620
,共4页
吴小茜%佘菲菲%丁惠%张静%陈月秀
吳小茜%佘菲菲%丁惠%張靜%陳月秀
오소천%사비비%정혜%장정%진월수
幽门螺杆菌%glmM%重组质粒%表达
幽門螺桿菌%glmM%重組質粒%錶達
유문라간균%glmM%중조질립%표체
目的构建幽门螺杆菌(Hp)pVAX1-glmM DNA重组质粒,体外转染SGC-7901细胞并鉴定其表达蛋白的抗原性.方法 RT-PCR方法从国际标准株NCTC11637中获取glmM全长基因,克隆插入T载体.测序后经酶切、连接反应将glmM的开放读码框架定向克隆入真核表达载体pVAX1,酶切初步鉴定后测序确认.通过脂质体法将pVAX1-glmMDNA重组质粒转染SGC-7901细胞,检测其转染效率,确定转染成功后RT-PCR法检测glmM在转录水平的表达,ELISA法鉴定表达蛋白的抗原性.结果DNA测序结果显示扩增出的glmM全长基因与GenBank公布的Hp glmM序列有96%的同源性.PCR、酶切和测序结果证实glmM目的基因成功克隆入真核表达载体pVAX1.重组质粒转染的细胞经RT-PCR扩增获得1.4kb片段,与目的基因大小相符.ELISA结果显示重组质粒转染细胞的超声破碎物及培养上清液中抗原的滴度比对照组高2倍以上.结论成功构建了pVAX1-glmM DNA重组质粒,其表达蛋白具有良好的抗原性,为进一步研究其抗Hp感染的效果及制备相应有效DNA疫苗奠定基础.
目的構建幽門螺桿菌(Hp)pVAX1-glmM DNA重組質粒,體外轉染SGC-7901細胞併鑒定其錶達蛋白的抗原性.方法 RT-PCR方法從國際標準株NCTC11637中穫取glmM全長基因,剋隆插入T載體.測序後經酶切、連接反應將glmM的開放讀碼框架定嚮剋隆入真覈錶達載體pVAX1,酶切初步鑒定後測序確認.通過脂質體法將pVAX1-glmMDNA重組質粒轉染SGC-7901細胞,檢測其轉染效率,確定轉染成功後RT-PCR法檢測glmM在轉錄水平的錶達,ELISA法鑒定錶達蛋白的抗原性.結果DNA測序結果顯示擴增齣的glmM全長基因與GenBank公佈的Hp glmM序列有96%的同源性.PCR、酶切和測序結果證實glmM目的基因成功剋隆入真覈錶達載體pVAX1.重組質粒轉染的細胞經RT-PCR擴增穫得1.4kb片段,與目的基因大小相符.ELISA結果顯示重組質粒轉染細胞的超聲破碎物及培養上清液中抗原的滴度比對照組高2倍以上.結論成功構建瞭pVAX1-glmM DNA重組質粒,其錶達蛋白具有良好的抗原性,為進一步研究其抗Hp感染的效果及製備相應有效DNA疫苗奠定基礎.
목적구건유문라간균(Hp)pVAX1-glmM DNA중조질립,체외전염SGC-7901세포병감정기표체단백적항원성.방법 RT-PCR방법종국제표준주NCTC11637중획취glmM전장기인,극륭삽입T재체.측서후경매절、련접반응장glmM적개방독마광가정향극륭입진핵표체재체pVAX1,매절초보감정후측서학인.통과지질체법장pVAX1-glmMDNA중조질립전염SGC-7901세포,검측기전염효솔,학정전염성공후RT-PCR법검측glmM재전록수평적표체,ELISA법감정표체단백적항원성.결과DNA측서결과현시확증출적glmM전장기인여GenBank공포적Hp glmM서렬유96%적동원성.PCR、매절화측서결과증실glmM목적기인성공극륭입진핵표체재체pVAX1.중조질립전염적세포경RT-PCR확증획득1.4kb편단,여목적기인대소상부.ELISA결과현시중조질립전염세포적초성파쇄물급배양상청액중항원적적도비대조조고2배이상.결론성공구건료pVAX1-glmM DNA중조질립,기표체단백구유량호적항원성,위진일보연구기항Hp감염적효과급제비상응유효DNA역묘전정기출.
