湖南中医药大学学报
湖南中醫藥大學學報
호남중의약대학학보
JOURNAL OF HUNAN COLLEGE OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
2007年
4期
12-15
,共4页
秦明春%王若光%秦莉花%刘小丽%李春梅%刘惠萍%叶赞
秦明春%王若光%秦莉花%劉小麗%李春梅%劉惠萍%葉讚
진명춘%왕약광%진리화%류소려%리춘매%류혜평%협찬
人脐静脉内皮细胞%细胞培养%流式细胞术%细胞周期%分离%鉴定
人臍靜脈內皮細胞%細胞培養%流式細胞術%細胞週期%分離%鑒定
인제정맥내피세포%세포배양%류식세포술%세포주기%분리%감정
目的 探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法,提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率.建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验基础.方法 取2根脐带(至少20 cm)冲净淤血,采用加工穿刺针固定脐静脉灌注消化液,一根用0.2%胶原酶Ⅱ,另一根用0.1%胶原酶Ⅰ和0.25%胰酶等比混合消化液,比较两种酶的消化效果.收集细胞并用舍有10 ng/Ml的VEGF的培养基中培养,观察细胞的生长及传代.并在倒置显微镜下观察细胞的形态学特点,同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定.用流式细胞术观察细胞周期.结果 两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞,胶原酶Ⅱ的消化效果稍优于混合消化酶,且比较理想的消化时间均为13 min,细胞接种后4～5h开始贴壁生长,1周左右可生长成单层,光镜下呈多角形,"铺路石"样排列,免疫组织化学法可见内皮细胞胞策中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应.细胞周期显示约有50.6%的细胞处于G0/G1期.结论 胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅰ与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法,而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液,成功率高,可靠性大,可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型.
目的 探討人臍靜脈內皮細胞的原代培養方法,提高體外分離培養血管內皮細胞的成功率.建立血管內皮細胞培養模型,為體外研究血管內皮細胞提供實驗基礎.方法 取2根臍帶(至少20 cm)遲淨淤血,採用加工穿刺針固定臍靜脈灌註消化液,一根用0.2%膠原酶Ⅱ,另一根用0.1%膠原酶Ⅰ和0.25%胰酶等比混閤消化液,比較兩種酶的消化效果.收集細胞併用捨有10 ng/Ml的VEGF的培養基中培養,觀察細胞的生長及傳代.併在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態學特點,同時用免疫組織化學的方法對所得細胞進行鑒定.用流式細胞術觀察細胞週期.結果 兩種消化酶方法均穫得瞭相噹數量的人臍靜脈內皮細胞,膠原酶Ⅱ的消化效果稍優于混閤消化酶,且比較理想的消化時間均為13 min,細胞接種後4～5h開始貼壁生長,1週左右可生長成單層,光鏡下呈多角形,"鋪路石"樣排列,免疫組織化學法可見內皮細胞胞策中人第Ⅷ因子相關抗原呈暘性反應.細胞週期顯示約有50.6%的細胞處于G0/G1期.結論 膠原酶Ⅱ和膠原酶Ⅰ與胰酶等比混閤消化液灌註法是穫得臍靜脈內皮細胞的一種可取方法,而膠原酶是分離培養臍靜脈內皮細胞的首選消化液,成功率高,可靠性大,可成功構建體外研究血管內皮細胞的模型.
목적 탐토인제정맥내피세포적원대배양방법,제고체외분리배양혈관내피세포적성공솔.건립혈관내피세포배양모형,위체외연구혈관내피세포제공실험기출.방법 취2근제대(지소20 cm)충정어혈,채용가공천자침고정제정맥관주소화액,일근용0.2%효원매Ⅱ,령일근용0.1%효원매Ⅰ화0.25%이매등비혼합소화액,비교량충매적소화효과.수집세포병용사유10 ng/Ml적VEGF적배양기중배양,관찰세포적생장급전대.병재도치현미경하관찰세포적형태학특점,동시용면역조직화학적방법대소득세포진행감정.용류식세포술관찰세포주기.결과 량충소화매방법균획득료상당수량적인제정맥내피세포,효원매Ⅱ적소화효과초우우혼합소화매,차비교이상적소화시간균위13 min,세포접충후4～5h개시첩벽생장,1주좌우가생장성단층,광경하정다각형,"포로석"양배렬,면역조직화학법가견내피세포포책중인제Ⅷ인자상관항원정양성반응.세포주기현시약유50.6%적세포처우G0/G1기.결론 효원매Ⅱ화효원매Ⅰ여이매등비혼합소화액관주법시획득제정맥내피세포적일충가취방법,이효원매시분리배양제정맥내피세포적수선소화액,성공솔고,가고성대,가성공구건체외연구혈관내피세포적모형.
