贵州农业科学
貴州農業科學
귀주농업과학
GUIZHOU AGRICULTURAL SCIENCES
2009年
7期
92-96
,共5页
唐源%赵健湖%罗阿东%王开功%周碧君%文明
唐源%趙健湖%囉阿東%王開功%週碧君%文明
당원%조건호%라아동%왕개공%주벽군%문명
产气荚膜梭菌%肠毒素基因%原核表达载体%构建
產氣莢膜梭菌%腸毒素基因%原覈錶達載體%構建
산기협막사균%장독소기인%원핵표체재체%구건
以含C型产气荚膜梭菌分离株(CP2)肠毒素基因的克隆载体pMD18-T-cpe为材料,根据产气荚膜梭菌开放阅读框设计合成一对特异性引物,采用PCR技术对其进行扩增,经BamHI和EcoRI双酶切后,从胶上回收目的基因,与经过相同两种内切酶处理的原核表达栽体pET32a连接,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞后,提取质粒进行PCR和BamHI/EcoRI双酶切鉴定后测序.结果表明,肠毒素基因已成功地克隆到原核表达栽体上(重组质粒命名为pET32a-cpe),从而构建了产气荚膜梭菌肠毒素基因的原核表达质粒.
以含C型產氣莢膜梭菌分離株(CP2)腸毒素基因的剋隆載體pMD18-T-cpe為材料,根據產氣莢膜梭菌開放閱讀框設計閤成一對特異性引物,採用PCR技術對其進行擴增,經BamHI和EcoRI雙酶切後,從膠上迴收目的基因,與經過相同兩種內切酶處理的原覈錶達栽體pET32a連接,轉化大腸桿菌DH5a感受態細胞後,提取質粒進行PCR和BamHI/EcoRI雙酶切鑒定後測序.結果錶明,腸毒素基因已成功地剋隆到原覈錶達栽體上(重組質粒命名為pET32a-cpe),從而構建瞭產氣莢膜梭菌腸毒素基因的原覈錶達質粒.
이함C형산기협막사균분리주(CP2)장독소기인적극륭재체pMD18-T-cpe위재료,근거산기협막사균개방열독광설계합성일대특이성인물,채용PCR기술대기진행확증,경BamHI화EcoRI쌍매절후,종효상회수목적기인,여경과상동량충내절매처리적원핵표체재체pET32a련접,전화대장간균DH5a감수태세포후,제취질립진행PCR화BamHI/EcoRI쌍매절감정후측서.결과표명,장독소기인이성공지극륭도원핵표체재체상(중조질립명명위pET32a-cpe),종이구건료산기협막사균장독소기인적원핵표체질립.
