CAJ | 학술논문

临床用重组人促红细胞生成素(rhEpo)是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell, CHO)表达的糖蛋白, 糖基对稳定蛋白的结构和生物活性非常重要, 但CHO表达体系生产成本高、产量低. 以大肠杆菌表达的促红细胞生成素为非糖基化蛋白(rh-ngEpo), 对其进行聚乙二醇(PEG)修饰可以提高蛋白稳定性和体内循环半衰期. 本文采用分子量为20000的N-末端专一性的单甲氧基聚乙二醇-丙醛(mPEG-ALD)修饰rh-ngEpo, 对影响修饰反应的因素进行了考察. 结果表明, 在最佳反应条件下, 单修饰率可达55%. 修饰混合物经离子交换层析分离, 获得了纯度大于95%的单修饰产物, 其二、三级结构证明与原蛋白相似. 肽图分析结果表明, PEG绝大部分修饰在蛋白N-末端的氨基酸残基上. ELISA分析表明, 单修饰产物的体外活性虽然比修饰前减少30%, 但热稳定性得到显著增强, 在SD大鼠体内的药代动力学性质得到显著提高. 研究结果表明, PEG可以在一定程度上替代糖基的作用, PEG修饰的非糖基化Epo有望成为一种新型的促红细胞生成蛋白药物.
림상용중조인촉홍세포생성소(rhEpo)시중국창서란소세포(Chinese hamster ovary cell, CHO)표체적당단백, 당기대은정단백적결구화생물활성비상중요, 단CHO표체체계생산성본고、산량저. 이대장간균표체적촉홍세포생성소위비당기화단백(rh-ngEpo), 대기진행취을이순(PEG)수식가이제고단백은정성화체내순배반쇠기. 본문채용분자량위20000적N-말단전일성적단갑양기취을이순-병철(mPEG-ALD)수식rh-ngEpo, 대영향수식반응적인소진행료고찰. 결과표명, 재최가반응조건하, 단수식솔가체55%. 수식혼합물경리자교환층석분리, 획득료순도대우95%적단수식산물, 기이、삼급결구증명여원단백상사. 태도분석결과표명, PEG절대부분수식재단백N-말단적안기산잔기상. ELISA분석표명, 단수식산물적체외활성수연비수식전감소30%, 단열은정성득도현저증강, 재SD대서체내적약대동역학성질득도현저제고. 연구결과표명, PEG가이재일정정도상체대당기적작용, PEG수식적비당기화Epo유망성위일충신형적촉홍세포생성단백약물.