中华妇幼临床医学杂志（电子版）
中華婦幼臨床醫學雜誌（電子版）
중화부유림상의학잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF OBSTETRICS & GYNECOLOGY AND PEDIATRICS(ELECTRONIC VERSION)
2010年
6期
411-416
,共6页
胡雯辉%于力%郝志宏%温跃强%张瑶%陈蓉燕%张又祥
鬍雯輝%于力%郝誌宏%溫躍彊%張瑤%陳蓉燕%張又祥
호문휘%우력%학지굉%온약강%장요%진용연%장우상
肾小球系膜细胞%转化生长因子-β1%Smad2%来氟米特
腎小毬繫膜細胞%轉化生長因子-β1%Smad2%來氟米特
신소구계막세포%전화생장인자-β1%Smad2%래불미특
目的 观察来氟米特(leflunomide,LEF)在转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-B1刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)表达Smad2过程中发挥的作用.方法 建立体外培养大鼠肾小球系膜细胞模型,经鉴定造模成功后第7代用于实验.按照对模型大鼠体外培养的肾小球系膜细胞的处理方式不同,将其分为TGF-β1,组(TGF-β1 5ng/mL),LEF-1组(LEF5μg/mL+TGF-β15ng/mL),LEF-2组(LEF 50 μg/mL+TGF-β1 5 ng/mL)和对照组(无血清RPMI 1640培养液+20%胎牛血清).分别于15 min,30 min,1h,2h和6h收集标本,用间接免疫荧光法检测各组磷酸化Smad2(phosphorylation-Smad2,P-Smad2)蛋白表达变化;采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2mRNA表达变化.结果 对照组磷酸化Smad2蛋白少量表达,阳性细胞率为(21.40士1.51)%.TGF-β1组阳性细胞率为(70.00±3.23)%,30 min时表达开始升高,1 h及2 h时表达明显增高,6 h表达开始下降.各时间点LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,阳性细胞率分别为(23.60±2.80)%和(25.81±1.29)%,细胞荧光强度呈减弱趋势.与TGF-β1组相比,LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,差异有显著意义(P<0.05).但LEF-1组和LEF-2组与对照组比较,差异无显著意义(P>0.05).肾小球系膜细胞中Smad2mRNA相对表达量,TGF-β1组显著高于对照组,2 h时达高峰.LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA显著低于TGF-β1组,差异有显著意义(P<0.01);但LEF-1组和LEF-2组间比较,差异无显著意义(P>0.05).LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA相对表达量1 h时较低,之后逐渐升高,说明随时间延长,来氟米特对体外培养的肾小球系膜细胞干预作用逐渐减弱.结论 经转化生长因子-β1刺激后,体外培养的大鼠肾小球系膜细胞磷酸化Smad2蛋白和Smad2mRNA相对表达量分别增加,来氟米特可降低Smad2蛋白和Smad2mRNA表达水平,为来氟米特的肾脏保护作用提供理论依据.
目的 觀察來氟米特(leflunomide,LEF)在轉化生長因子(transforming growth factor,TGF)-B1刺激大鼠腎小毬繫膜細胞(glomerular mesangial cell,GMC)錶達Smad2過程中髮揮的作用.方法 建立體外培養大鼠腎小毬繫膜細胞模型,經鑒定造模成功後第7代用于實驗.按照對模型大鼠體外培養的腎小毬繫膜細胞的處理方式不同,將其分為TGF-β1,組(TGF-β1 5ng/mL),LEF-1組(LEF5μg/mL+TGF-β15ng/mL),LEF-2組(LEF 50 μg/mL+TGF-β1 5 ng/mL)和對照組(無血清RPMI 1640培養液+20%胎牛血清).分彆于15 min,30 min,1h,2h和6h收集標本,用間接免疫熒光法檢測各組燐痠化Smad2(phosphorylation-Smad2,P-Smad2)蛋白錶達變化;採用熒光半定量RT-PCR法檢測各組Smad2mRNA錶達變化.結果 對照組燐痠化Smad2蛋白少量錶達,暘性細胞率為(21.40士1.51)%.TGF-β1組暘性細胞率為(70.00±3.23)%,30 min時錶達開始升高,1 h及2 h時錶達明顯增高,6 h錶達開始下降.各時間點LEF-1組和LEF-2組燐痠化Smad2蛋白錶達下降,暘性細胞率分彆為(23.60±2.80)%和(25.81±1.29)%,細胞熒光彊度呈減弱趨勢.與TGF-β1組相比,LEF-1組和LEF-2組燐痠化Smad2蛋白錶達下降,差異有顯著意義(P<0.05).但LEF-1組和LEF-2組與對照組比較,差異無顯著意義(P>0.05).腎小毬繫膜細胞中Smad2mRNA相對錶達量,TGF-β1組顯著高于對照組,2 h時達高峰.LEF-1組和LEF-2組Smad2mRNA顯著低于TGF-β1組,差異有顯著意義(P<0.01);但LEF-1組和LEF-2組間比較,差異無顯著意義(P>0.05).LEF-1組和LEF-2組Smad2mRNA相對錶達量1 h時較低,之後逐漸升高,說明隨時間延長,來氟米特對體外培養的腎小毬繫膜細胞榦預作用逐漸減弱.結論 經轉化生長因子-β1刺激後,體外培養的大鼠腎小毬繫膜細胞燐痠化Smad2蛋白和Smad2mRNA相對錶達量分彆增加,來氟米特可降低Smad2蛋白和Smad2mRNA錶達水平,為來氟米特的腎髒保護作用提供理論依據.
목적 관찰래불미특(leflunomide,LEF)재전화생장인자(transforming growth factor,TGF)-B1자격대서신소구계막세포(glomerular mesangial cell,GMC)표체Smad2과정중발휘적작용.방법 건입체외배양대서신소구계막세포모형,경감정조모성공후제7대용우실험.안조대모형대서체외배양적신소구계막세포적처리방식불동,장기분위TGF-β1,조(TGF-β1 5ng/mL),LEF-1조(LEF5μg/mL+TGF-β15ng/mL),LEF-2조(LEF 50 μg/mL+TGF-β1 5 ng/mL)화대조조(무혈청RPMI 1640배양액+20%태우혈청).분별우15 min,30 min,1h,2h화6h수집표본,용간접면역형광법검측각조린산화Smad2(phosphorylation-Smad2,P-Smad2)단백표체변화;채용형광반정량RT-PCR법검측각조Smad2mRNA표체변화.결과 대조조린산화Smad2단백소량표체,양성세포솔위(21.40사1.51)%.TGF-β1조양성세포솔위(70.00±3.23)%,30 min시표체개시승고,1 h급2 h시표체명현증고,6 h표체개시하강.각시간점LEF-1조화LEF-2조린산화Smad2단백표체하강,양성세포솔분별위(23.60±2.80)%화(25.81±1.29)%,세포형광강도정감약추세.여TGF-β1조상비,LEF-1조화LEF-2조린산화Smad2단백표체하강,차이유현저의의(P<0.05).단LEF-1조화LEF-2조여대조조비교,차이무현저의의(P>0.05).신소구계막세포중Smad2mRNA상대표체량,TGF-β1조현저고우대조조,2 h시체고봉.LEF-1조화LEF-2조Smad2mRNA현저저우TGF-β1조,차이유현저의의(P<0.01);단LEF-1조화LEF-2조간비교,차이무현저의의(P>0.05).LEF-1조화LEF-2조Smad2mRNA상대표체량1 h시교저,지후축점승고,설명수시간연장,래불미특대체외배양적신소구계막세포간예작용축점감약.결론 경전화생장인자-β1자격후,체외배양적대서신소구계막세포린산화Smad2단백화Smad2mRNA상대표체량분별증가,래불미특가강저Smad2단백화Smad2mRNA표체수평,위래불미특적신장보호작용제공이론의거.
