医学综述
醫學綜述
의학종술
MEDICAL RECAPITULATE
2011年
20期
3158-3161
,共4页
王彪%张炜强%单秀英%刘照亮%郭国祥%庄福连
王彪%張煒彊%單秀英%劉照亮%郭國祥%莊福連
왕표%장위강%단수영%류조량%곽국상%장복련
RNA干扰%促血管生成素2%慢病毒载体%质粒载体
RNA榦擾%促血管生成素2%慢病毒載體%質粒載體
RNA간우%촉혈관생성소2%만병독재체%질립재체
目的 构建促血管生成素(Ang)2基因的RNAi慢病毒表达载体,并鉴定其正确性.方法 将经XbaⅠ酶切电泳鉴定的pSilencer 1.0-U6-Ang2-siRNA重组质粒与经XbaⅠ酶切电泳鉴定的嗜中性多形核白细胞-绿色荧光蛋白转移质粒(pNL-EGFP)载体连接,产生pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA慢病毒转移质粒,再以pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA慢病毒转移质粒、水疱性口炎病毒G蛋白包膜质粒和包装质粒三质粒共转染293T细胞产生慢病毒,收集病毒上清液并测定病毒滴度.结果 成功构建pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA慢病毒转移质粒2条,通过XbaⅠ酶切电泳及测序鉴定,证明Ang2-siRNA核苷酸序列插入的正确性.利用三质粒慢病毒包装系统生产EGFP-Ang2-siRNA病毒,收集病毒上清,并测得病毒滴度为9×103/μL.结论 成功构建了Ang2基因的RNAi慢病毒表达载体,为下一步进行干扰体内外恶性黑素瘤Ang2的表达奠定基础.
目的 構建促血管生成素(Ang)2基因的RNAi慢病毒錶達載體,併鑒定其正確性.方法 將經XbaⅠ酶切電泳鑒定的pSilencer 1.0-U6-Ang2-siRNA重組質粒與經XbaⅠ酶切電泳鑒定的嗜中性多形覈白細胞-綠色熒光蛋白轉移質粒(pNL-EGFP)載體連接,產生pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA慢病毒轉移質粒,再以pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA慢病毒轉移質粒、水皰性口炎病毒G蛋白包膜質粒和包裝質粒三質粒共轉染293T細胞產生慢病毒,收集病毒上清液併測定病毒滴度.結果 成功構建pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA慢病毒轉移質粒2條,通過XbaⅠ酶切電泳及測序鑒定,證明Ang2-siRNA覈苷痠序列插入的正確性.利用三質粒慢病毒包裝繫統生產EGFP-Ang2-siRNA病毒,收集病毒上清,併測得病毒滴度為9×103/μL.結論 成功構建瞭Ang2基因的RNAi慢病毒錶達載體,為下一步進行榦擾體內外噁性黑素瘤Ang2的錶達奠定基礎.
목적 구건촉혈관생성소(Ang)2기인적RNAi만병독표체재체,병감정기정학성.방법 장경XbaⅠ매절전영감정적pSilencer 1.0-U6-Ang2-siRNA중조질립여경XbaⅠ매절전영감정적기중성다형핵백세포-록색형광단백전이질립(pNL-EGFP)재체련접,산생pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA만병독전이질립,재이pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA만병독전이질립、수포성구염병독G단백포막질립화포장질립삼질립공전염293T세포산생만병독,수집병독상청액병측정병독적도.결과 성공구건pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA만병독전이질립2조,통과XbaⅠ매절전영급측서감정,증명Ang2-siRNA핵감산서렬삽입적정학성.이용삼질립만병독포장계통생산EGFP-Ang2-siRNA병독,수집병독상청,병측득병독적도위9×103/μL.결론 성공구건료Ang2기인적RNAi만병독표체재체,위하일보진행간우체내외악성흑소류Ang2적표체전정기출.
