中华传染病杂志
中華傳染病雜誌
중화전염병잡지
CHINESE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
2005年
4期
229-232
,共4页
陆慧琦%韩焕兴%安峰%叶伟民%曾万杰%薛菖
陸慧琦%韓煥興%安峰%葉偉民%曾萬傑%薛菖
륙혜기%한환흥%안봉%협위민%증만걸%설창
干扰素α%肝炎表面抗原,乙型%重组融合蛋白质类%HepG2.2.15细胞
榦擾素α%肝炎錶麵抗原,乙型%重組融閤蛋白質類%HepG2.2.15細胞
간우소α%간염표면항원,을형%중조융합단백질류%HepG2.2.15세포
目的构建人源单克隆抗-HBs Fab片段-IFN-α表达载体,对原核表达该融合蛋白的可行性及其效果进行实验研究.方法用聚合酶链反应(PCR)体外扩增目的基因IFN-α,单酶点插入已含人源抗-HBs Fab基因的载体,插入点位于轻链基因3'末端,利用酶切、PCR鉴定,测序筛选正确插入的阳性克隆,转化大肠埃希菌Top10,挑选单克隆表达、纯化目的蛋白,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测融合蛋白的抗原性,用Dot-blot和WISH细胞检测其生物学活性.结果利用插入了人源抗-HBs Fab段基因及IFN-α基因的pBAD/gⅢA原核表达系统,成功表达了具生物活性的轻链与IFN-α的融合蛋白,其与HBsAg的亲合力与抗-HBs-Fab相近,而且具有干扰素的活性.融合蛋白对HepG2.2.15细胞初步实验结果亦显示出其具有良好的靶向性及致凋亡作用.结论轻链与干扰素IFN-α融合蛋白的成功表达表明,应用原核系统能够同时表达特异抗体和其介导的某些生物活性因子,不失为一种经济、有效的方法,为特异抗体及其介导融合蛋白的制备和临床应用提供了实验依据.
目的構建人源單剋隆抗-HBs Fab片段-IFN-α錶達載體,對原覈錶達該融閤蛋白的可行性及其效果進行實驗研究.方法用聚閤酶鏈反應(PCR)體外擴增目的基因IFN-α,單酶點插入已含人源抗-HBs Fab基因的載體,插入點位于輕鏈基因3'末耑,利用酶切、PCR鑒定,測序篩選正確插入的暘性剋隆,轉化大腸埃希菌Top10,挑選單剋隆錶達、純化目的蛋白,用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測融閤蛋白的抗原性,用Dot-blot和WISH細胞檢測其生物學活性.結果利用插入瞭人源抗-HBs Fab段基因及IFN-α基因的pBAD/gⅢA原覈錶達繫統,成功錶達瞭具生物活性的輕鏈與IFN-α的融閤蛋白,其與HBsAg的親閤力與抗-HBs-Fab相近,而且具有榦擾素的活性.融閤蛋白對HepG2.2.15細胞初步實驗結果亦顯示齣其具有良好的靶嚮性及緻凋亡作用.結論輕鏈與榦擾素IFN-α融閤蛋白的成功錶達錶明,應用原覈繫統能夠同時錶達特異抗體和其介導的某些生物活性因子,不失為一種經濟、有效的方法,為特異抗體及其介導融閤蛋白的製備和臨床應用提供瞭實驗依據.
목적구건인원단극륭항-HBs Fab편단-IFN-α표체재체,대원핵표체해융합단백적가행성급기효과진행실험연구.방법용취합매련반응(PCR)체외확증목적기인IFN-α,단매점삽입이함인원항-HBs Fab기인적재체,삽입점위우경련기인3'말단,이용매절、PCR감정,측서사선정학삽입적양성극륭,전화대장애희균Top10,도선단극륭표체、순화목적단백,용매련면역흡부법(ELISA)검측융합단백적항원성,용Dot-blot화WISH세포검측기생물학활성.결과이용삽입료인원항-HBs Fab단기인급IFN-α기인적pBAD/gⅢA원핵표체계통,성공표체료구생물활성적경련여IFN-α적융합단백,기여HBsAg적친합력여항-HBs-Fab상근,이차구유간우소적활성.융합단백대HepG2.2.15세포초보실험결과역현시출기구유량호적파향성급치조망작용.결론경련여간우소IFN-α융합단백적성공표체표명,응용원핵계통능구동시표체특이항체화기개도적모사생물활성인자,불실위일충경제、유효적방법,위특이항체급기개도융합단백적제비화림상응용제공료실험의거.
