中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
20期
3755-3758
,共4页
潘雪珂%陈朝%田思佳%Joseph M. Kaminski%余克明%庄菁
潘雪珂%陳朝%田思佳%Joseph M. Kaminski%餘剋明%莊菁
반설가%진조%전사가%Joseph M. Kaminski%여극명%장정
piggyBac转座子%SO-RB50细胞%转染%Rb基因%基因治疗
piggyBac轉座子%SO-RB50細胞%轉染%Rb基因%基因治療
piggyBac전좌자%SO-RB50세포%전염%Rb기인%기인치료
背景:外源性Rb基因的导入是抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的有效途径,piggyBac转座子介导的外源基因表达载体高效安全,在基因治疗方面具有广阔的应用前景.目的:探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用.方法:采用RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA,定向插入到载体pPiggyBac,获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb;通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50.结果与结论:考马斯亮蓝染色证明piggyBac转座子系统的转染效率最高,荧光定量PCR以及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率最高且可在细胞中长期稳定表达,MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响最为显著.结果提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体.
揹景:外源性Rb基因的導入是抑製視網膜母細胞瘤細胞增殖的有效途徑,piggyBac轉座子介導的外源基因錶達載體高效安全,在基因治療方麵具有廣闊的應用前景.目的:探討piggyBac轉座子介導的外源性Rb基因的轉染效率及其對視網膜母細胞瘤細胞的抑製作用.方法:採用RT-PCR技術擴增Rb基因編碼區Rb cDNA,定嚮插入到載體pPiggyBac,穫得PiggyBac調節的Rb錶達質粒pPiggyBac-Rb;通過單獨轉染或閤併pPiggyBac-helper轉染人視網膜母細胞瘤細胞SO-RB50.結果與結論:攷馬斯亮藍染色證明piggyBac轉座子繫統的轉染效率最高,熒光定量PCR以及免疫熒光實驗證明其介導的目的基因Rb與宿主SO-RB50細胞基因組整閤效率最高且可在細胞中長期穩定錶達,MTT實驗證明經其所介導的外源性Rb基因錶達對細胞活性影響最為顯著.結果提示piggyBac轉座子有可能成為視網膜母細胞瘤基因治療的安全有效載體.
배경:외원성Rb기인적도입시억제시망막모세포류세포증식적유효도경,piggyBac전좌자개도적외원기인표체재체고효안전,재기인치료방면구유엄활적응용전경.목적:탐토piggyBac전좌자개도적외원성Rb기인적전염효솔급기대시망막모세포류세포적억제작용.방법:채용RT-PCR기술확증Rb기인편마구Rb cDNA,정향삽입도재체pPiggyBac,획득PiggyBac조절적Rb표체질립pPiggyBac-Rb;통과단독전염혹합병pPiggyBac-helper전염인시망막모세포류세포SO-RB50.결과여결론:고마사량람염색증명piggyBac전좌자계통적전염효솔최고,형광정량PCR이급면역형광실험증명기개도적목적기인Rb여숙주SO-RB50세포기인조정합효솔최고차가재세포중장기은정표체,MTT실험증명경기소개도적외원성Rb기인표체대세포활성영향최위현저.결과제시piggyBac전좌자유가능성위시망막모세포류기인치료적안전유효재체.
