解剖科学进展
解剖科學進展
해부과학진전
PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES
2012年
3期
208-211
,共4页
陈航%廖生俊%王蒴%方瑾
陳航%廖生俊%王蒴%方瑾
진항%료생준%왕삭%방근
ND-1单克隆抗体%单链抗体Fv%绿色荧光蛋白%大肠癌
ND-1單剋隆抗體%單鏈抗體Fv%綠色熒光蛋白%大腸癌
ND-1단극륭항체%단련항체Fv%록색형광단백%대장암
目的 构建并表达绿色荧光蛋白(GFP)和鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的融合蛋白,产生具有荧光的抗体.方法 将鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的基因克隆到pET28a (+)-GFP的表达载体,转化到大肠杆菌E.coli BL21中进行融合基因ND- 1-scFv/GFP诱导表达.Ni-NTA亲和层析对表达产物进行分离、纯化,免疫印迹和荧光显微镜方法验证融合蛋白的表达.结果 ND-1scFv被克隆到表达载体pET28a(+)-GFP中,诱导表达的融合蛋白以包涵体形式存在,分子量为58kDa.SDS-PAGE灰度扫描结果显示纯化后的蛋白纯度为90％,荧光显微镜检测显示,表达有目的蛋白的大肠杆菌BL21具有明显的绿色荧光.结论 成功构建并表达融合基因ND-1-scFv/GFP,为该单抗的肿瘤特异成像研究奠定了基础.
目的 構建併錶達綠色熒光蛋白(GFP)和鼠抗人大腸癌單鏈抗體ND-1scFv的融閤蛋白,產生具有熒光的抗體.方法 將鼠抗人大腸癌單鏈抗體ND-1scFv的基因剋隆到pET28a (+)-GFP的錶達載體,轉化到大腸桿菌E.coli BL21中進行融閤基因ND- 1-scFv/GFP誘導錶達.Ni-NTA親和層析對錶達產物進行分離、純化,免疫印跡和熒光顯微鏡方法驗證融閤蛋白的錶達.結果 ND-1scFv被剋隆到錶達載體pET28a(+)-GFP中,誘導錶達的融閤蛋白以包涵體形式存在,分子量為58kDa.SDS-PAGE灰度掃描結果顯示純化後的蛋白純度為90％,熒光顯微鏡檢測顯示,錶達有目的蛋白的大腸桿菌BL21具有明顯的綠色熒光.結論 成功構建併錶達融閤基因ND-1-scFv/GFP,為該單抗的腫瘤特異成像研究奠定瞭基礎.
목적 구건병표체록색형광단백(GFP)화서항인대장암단련항체ND-1scFv적융합단백,산생구유형광적항체.방법 장서항인대장암단련항체ND-1scFv적기인극륭도pET28a (+)-GFP적표체재체,전화도대장간균E.coli BL21중진행융합기인ND- 1-scFv/GFP유도표체.Ni-NTA친화층석대표체산물진행분리、순화,면역인적화형광현미경방법험증융합단백적표체.결과 ND-1scFv피극륭도표체재체pET28a(+)-GFP중,유도표체적융합단백이포함체형식존재,분자량위58kDa.SDS-PAGE회도소묘결과현시순화후적단백순도위90％,형광현미경검측현시,표체유목적단백적대장간균BL21구유명현적록색형광.결론 성공구건병표체융합기인ND-1-scFv/GFP,위해단항적종류특이성상연구전정료기출.
