中国组织化学与细胞化学杂志
中國組織化學與細胞化學雜誌
중국조직화학여세포화학잡지
CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISY AND CYTOCHEMISY
2011年
2期
153-161
,共9页
赵刚%冯文静%徐西振%赵俊杰%汪培华%汪道文%凃玲
趙剛%馮文靜%徐西振%趙俊傑%汪培華%汪道文%凃玲
조강%풍문정%서서진%조준걸%왕배화%왕도문%도령
肾间质纤维化%核心蛋白聚糖%转移生长因子%丝裂原活化的蛋白激酶K
腎間質纖維化%覈心蛋白聚糖%轉移生長因子%絲裂原活化的蛋白激酶K
신간질섬유화%핵심단백취당%전이생장인자%사렬원활화적단백격매K
目的 探讨腺相关病毒介导的核心蛋白聚糖(decorin,DCN)基因过表达对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的影响和机制.方法 将DCN基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)基因克隆入重组腺相关病毒(rAAV)载体中,在HEK293细胞中包装成rAAV-GFP和rAAV-DCN病毒.健康雄性wistar大鼠32只,随机分为假手术组(sham,n=8),手术组(operation,n=8),手术+ rAAV-GFP病毒尾静脉注射组(GFP组),手术+ rAAV-DCN基因尾静脉注射组(DCN组).携带相应基因的病毒注射后3周行5/6肾切除术构建肾间质纤维化模型.术后第12周处死动物,肾组织切片行HE染色,天狼星红(Sirius red)染色和Masson染色.免疫组化方法检测TGFβ1和α-SMA.Western Blot检测肾组织TGFβ1、α-SMA、E-cadherin 、p-smad2 、smad2、samd7和p-P38MAPK表达水平.结果 DCN基因过表达显著抑制了5/6肾切除术所致血压升高和肾功能下降(P<0.05),明显减轻了5/6肾切除大鼠肾小球萎缩与代偿性肥大,肾小管扩张及管型形成.Sirius red 和Masson染色表明DCN过表达明显抑制了5/6肾切除大鼠肾脏胶原沉积(P<0.05).免疫组化结果显示DCN过表达明显减少了肾组织TGFβ1和α-SMA的表达(P<0.05).Western blot结果显示DCN过表达明显下调了TGFβ1、α-SMA、p-smad2、p-P38MAPK的表达,显著上调了E-cadherin and samd7的表达(P<0.05).结论 腺相关病毒介导的DCN基因过表达显著抑制5/6肾切除大鼠肾间质纤维化而保护肾功能,其机制与下调TGFβ1、α-SMA 、p-smad2 、p-P38MAPK表达和上调E-cadherin和samd7表达有关.
目的 探討腺相關病毒介導的覈心蛋白聚糖(decorin,DCN)基因過錶達對5/6腎切除大鼠腎間質纖維化的影響和機製.方法 將DCN基因和綠色熒光蛋白基因(GFP)基因剋隆入重組腺相關病毒(rAAV)載體中,在HEK293細胞中包裝成rAAV-GFP和rAAV-DCN病毒.健康雄性wistar大鼠32隻,隨機分為假手術組(sham,n=8),手術組(operation,n=8),手術+ rAAV-GFP病毒尾靜脈註射組(GFP組),手術+ rAAV-DCN基因尾靜脈註射組(DCN組).攜帶相應基因的病毒註射後3週行5/6腎切除術構建腎間質纖維化模型.術後第12週處死動物,腎組織切片行HE染色,天狼星紅(Sirius red)染色和Masson染色.免疫組化方法檢測TGFβ1和α-SMA.Western Blot檢測腎組織TGFβ1、α-SMA、E-cadherin 、p-smad2 、smad2、samd7和p-P38MAPK錶達水平.結果 DCN基因過錶達顯著抑製瞭5/6腎切除術所緻血壓升高和腎功能下降(P<0.05),明顯減輕瞭5/6腎切除大鼠腎小毬萎縮與代償性肥大,腎小管擴張及管型形成.Sirius red 和Masson染色錶明DCN過錶達明顯抑製瞭5/6腎切除大鼠腎髒膠原沉積(P<0.05).免疫組化結果顯示DCN過錶達明顯減少瞭腎組織TGFβ1和α-SMA的錶達(P<0.05).Western blot結果顯示DCN過錶達明顯下調瞭TGFβ1、α-SMA、p-smad2、p-P38MAPK的錶達,顯著上調瞭E-cadherin and samd7的錶達(P<0.05).結論 腺相關病毒介導的DCN基因過錶達顯著抑製5/6腎切除大鼠腎間質纖維化而保護腎功能,其機製與下調TGFβ1、α-SMA 、p-smad2 、p-P38MAPK錶達和上調E-cadherin和samd7錶達有關.
목적 탐토선상관병독개도적핵심단백취당(decorin,DCN)기인과표체대5/6신절제대서신간질섬유화적영향화궤제.방법 장DCN기인화록색형광단백기인(GFP)기인극륭입중조선상관병독(rAAV)재체중,재HEK293세포중포장성rAAV-GFP화rAAV-DCN병독.건강웅성wistar대서32지,수궤분위가수술조(sham,n=8),수술조(operation,n=8),수술+ rAAV-GFP병독미정맥주사조(GFP조),수술+ rAAV-DCN기인미정맥주사조(DCN조).휴대상응기인적병독주사후3주행5/6신절제술구건신간질섬유화모형.술후제12주처사동물,신조직절편행HE염색,천랑성홍(Sirius red)염색화Masson염색.면역조화방법검측TGFβ1화α-SMA.Western Blot검측신조직TGFβ1、α-SMA、E-cadherin 、p-smad2 、smad2、samd7화p-P38MAPK표체수평.결과 DCN기인과표체현저억제료5/6신절제술소치혈압승고화신공능하강(P<0.05),명현감경료5/6신절제대서신소구위축여대상성비대,신소관확장급관형형성.Sirius red 화Masson염색표명DCN과표체명현억제료5/6신절제대서신장효원침적(P<0.05).면역조화결과현시DCN과표체명현감소료신조직TGFβ1화α-SMA적표체(P<0.05).Western blot결과현시DCN과표체명현하조료TGFβ1、α-SMA、p-smad2、p-P38MAPK적표체,현저상조료E-cadherin and samd7적표체(P<0.05).결론 선상관병독개도적DCN기인과표체현저억제5/6신절제대서신간질섬유화이보호신공능,기궤제여하조TGFβ1、α-SMA 、p-smad2 、p-P38MAPK표체화상조E-cadherin화samd7표체유관.
