中国动物检疫
中國動物檢疫
중국동물검역
CHINA ANMAL QUARANTINE
2011年
2期
40-43
,共4页
毕研丽%郭广君%吕素芳%魏凤%沈志强
畢研麗%郭廣君%呂素芳%魏鳳%瀋誌彊
필연려%곽엄군%려소방%위봉%침지강
伪狂犬病病毒%TK基因%Overlap PCR%转移载体
偽狂犬病病毒%TK基因%Overlap PCR%轉移載體
위광견병병독%TK기인%Overlap PCR%전이재체
构建伪狂犬病毒TK基因缺失载体,在BHK-21细胞中表达,为研究TK基因生物学活性及其基因工程疫苗研制提供科学依据.根据伪狂犬病病毒sA株TK基因序列,设计引物,通过Overlap PCR扩增到长约1814bp的TK基因,与PMDl8-T载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pMD-TK与表达载体pBluescript SK(+)分别用限制性内切酶BamH I,HindIII酶切后,定向亚克隆;重组表达质粒pBTK经PCR、酶切鉴定后,阳性质粒进行测序.利用脂质体介导阳性重组质粒pBTK转染BHK.21细胞,通过噬斑纯化获得获得重组病毒PRV/TK-.该重组病毒在体外传15代后仍具有良好的遗传稳定性,应用PCR技术可从体外反复传代的阳性细胞基因组中扩增到TK基因,其TCID50毒价是5.75.本实验为PRV基因功能的研究及PRV基因缺失苗的研究提供了基础.
構建偽狂犬病毒TK基因缺失載體,在BHK-21細胞中錶達,為研究TK基因生物學活性及其基因工程疫苗研製提供科學依據.根據偽狂犬病病毒sA株TK基因序列,設計引物,通過Overlap PCR擴增到長約1814bp的TK基因,與PMDl8-T載體連接,將鑒定為暘性的重組質粒pMD-TK與錶達載體pBluescript SK(+)分彆用限製性內切酶BamH I,HindIII酶切後,定嚮亞剋隆;重組錶達質粒pBTK經PCR、酶切鑒定後,暘性質粒進行測序.利用脂質體介導暘性重組質粒pBTK轉染BHK.21細胞,通過噬斑純化穫得穫得重組病毒PRV/TK-.該重組病毒在體外傳15代後仍具有良好的遺傳穩定性,應用PCR技術可從體外反複傳代的暘性細胞基因組中擴增到TK基因,其TCID50毒價是5.75.本實驗為PRV基因功能的研究及PRV基因缺失苗的研究提供瞭基礎.
구건위광견병독TK기인결실재체,재BHK-21세포중표체,위연구TK기인생물학활성급기기인공정역묘연제제공과학의거.근거위광견병병독sA주TK기인서렬,설계인물,통과Overlap PCR확증도장약1814bp적TK기인,여PMDl8-T재체련접,장감정위양성적중조질립pMD-TK여표체재체pBluescript SK(+)분별용한제성내절매BamH I,HindIII매절후,정향아극륭;중조표체질립pBTK경PCR、매절감정후,양성질립진행측서.이용지질체개도양성중조질립pBTK전염BHK.21세포,통과서반순화획득획득중조병독PRV/TK-.해중조병독재체외전15대후잉구유량호적유전은정성,응용PCR기술가종체외반복전대적양성세포기인조중확증도TK기인,기TCID50독개시5.75.본실험위PRV기인공능적연구급PRV기인결실묘적연구제공료기출.
