CAJ | 학술논문

目的:用Lipofectamine转染试剂介导,将重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-bFGF转染体外培养的缺血性心肌病患者骨髓基质干细胞,检测转染效果及目的基因的表达情况.材料与方法:抽取临床确诊缺血性心肌病患者髂嵴骨髓,贴壁分离法接种培养骨髓基质干细胞.绘制生长曲线.MTT比色法检测细胞活力.取第二代细胞,使用Lipofectamine转染试剂,将重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-bFGF转染骨髓基质干细胞,转染后4h、12h、24h、48h、72h以及传代后分别用倒置荧光显微镜观察标志基因增强绿荧光蛋白的表达效率及荧光强度的变化,计算转染效率.取各观察时间点的培养上清液,酶联免疫吸附试验检测其中bFGF的浓度.转染细胞爬片行bFGF免疫组化染色检测bFGF的表达.结果:缺血性心肌病患者基质干细胞在接种后24小时开始贴壁,伸展成长梭形.MTT比色法测细胞活力达96%.在不同时间点观测EGFP表达情况,发现在转染后4h即有细胞表达绿色荧光蛋白,荧光强度和表达细胞总数在48h达高峰,72h时可见部分细胞荧光强度下降,传代后仍可观察到EGFP的表达.ELISA检测不同时间点转染上清液中分泌的bFGF浓度,结果在4h-48h内浓度呈渐进上升的趋势,在48h最高可达23.5ng/ml.转染后的部分细胞形态发生变化.转染细胞爬片行bFGF免疫组化染色证实在胞浆中有bFGF颗粒着色阳性.结论:使用Lipofectamine转染试剂可有效地转染体外培养的缺血性心肌病患者骨髓基质干细胞.转染后的培养上清可在较长时间内检测到较高浓度的bFGF的分泌.bFGF基因转染可促进骨髓基质干细胞的增殖、分化.
목적:용Lipofectamine전염시제개도,장중조진핵표체질립pIRES2-EGFP-bFGF전염체외배양적결혈성심기병환자골수기질간세포,검측전염효과급목적기인적표체정황.재료여방법:추취림상학진결혈성심기병환자가척골수,첩벽분리법접충배양골수기질간세포.회제생장곡선.MTT비색법검측세포활력.취제이대세포,사용Lipofectamine전염시제,장중조진핵표체질립pIRES2-EGFP-bFGF전염골수기질간세포,전염후4h、12h、24h、48h、72h이급전대후분별용도치형광현미경관찰표지기인증강록형광단백적표체효솔급형광강도적변화,계산전염효솔.취각관찰시간점적배양상청액,매련면역흡부시험검측기중bFGF적농도.전염세포파편행bFGF면역조화염색검측bFGF적표체.결과:결혈성심기병환자기질간세포재접충후24소시개시첩벽,신전성장사형.MTT비색법측세포활력체96%.재불동시간점관측EGFP표체정황,발현재전염후4h즉유세포표체록색형광단백,형광강도화표체세포총수재48h체고봉,72h시가견부분세포형광강도하강,전대후잉가관찰도EGFP적표체.ELISA검측불동시간점전염상청액중분비적bFGF농도,결과재4h-48h내농도정점진상승적추세,재48h최고가체23.5ng/ml.전염후적부분세포형태발생변화.전염세포파편행bFGF면역조화염색증실재포장중유bFGF과립착색양성.결론:사용Lipofectamine전염시제가유효지전염체외배양적결혈성심기병환자골수기질간세포.전염후적배양상청가재교장시간내검측도교고농도적bFGF적분비.bFGF기인전염가촉진골수기질간세포적증식、분화.