CAJ | 학술논문

目的探讨兔口腔黏膜细胞的体外培养方法,并以其为种子细胞与异体膀胱黏膜下脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)复合,构建组织工程尿道. 方法 18只10周龄雄性新西兰大耳白兔,体重0.3～0.5 kg.取其中12只兔口腔黏膜组织,分离获得口腔黏膜细胞.将口腔黏膜细胞分别接种于有3T3细胞及无3T3细胞的培养皿进行培养,接种后第2天于倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,绘制细胞生长曲线,观察生长增殖情况,并行免疫荧光组织化学染色鉴定.取余6只兔膀胱,经脱细胞处理制备BAMG,随机取1 cm×1 cm组织行HE染色,观察脱细胞效果.将接种于有3T3细胞培养皿培养获得的第2代口腔黏膜细胞种植于BAMG上,培养1周后,行HE染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG的复合状况. 结果倒置相差显微镜下观察,接种于有3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞可传至7～8代,其细胞形态均一,功能良好;无3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞形态多样,传至第2代时,即开始出现老化.细胞生长曲线显示,两种方法培养的口腔黏膜细胞均于第8天开始呈对数增长,第14天达峰值.接种于有3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞,培养至融合时所获得细胞数量明显多于接种于无3T3细胞培养皿的u腔黏膜细胞.两种方法培养的口腔黏膜细胞行免疫荧光染色,均呈绿色荧光.HE染色观察,BAMG经脱细胞处理后未见细胞,脱细胞效果良好.复合培养1周后,HE染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG复合良好. 结论兔口腔黏膜细胞可在体外成功培养、扩增,与同种异体BAMG复合后生长良好,为构建组织工程尿道提供了一种新的选择.
목적 탐토토구강점막세포적체외배양방법,병이기위충자세포여이체방광점막하탈세포기질(bladder acellular matrix graft,BAMG)복합,구건조직공정뇨도. 방법 18지10주령웅성신서란대이백토,체중0.3～0.5 kg.취기중12지토구강점막조직,분리획득구강점막세포.장구강점막세포분별접충우유3T3세포급무3T3세포적배양명진행배양,접충후제2천우도치상차현미경하관찰세포형태변화,회제세포생장곡선,관찰생장증식정황,병행면역형광조직화학염색감정.취여6지토방광,경탈세포처리제비BAMG,수궤취1 cm×1 cm조직행HE염색,관찰탈세포효과.장접충우유3T3세포배양명배양획득적제2대구강점막세포충식우BAMG상,배양1주후,행HE염색급소묘전경관찰구강점막세포여BAMG적복합상황. 결과 도치상차현미경하관찰,접충우유3T3세포배양명적구강점막세포가전지7～8대,기세포형태균일,공능량호;무3T3세포배양명적구강점막세포형태다양,전지제2대시,즉개시출현노화.세포생장곡선현시,량충방법배양적구강점막세포균우제8천개시정대수증장,제14천체봉치.접충우유3T3세포배양명적구강점막세포,배양지융합시소획득세포수량명현다우접충우무3T3세포배양명적u강점막세포.량충방법배양적구강점막세포행면역형광염색,균정록색형광.HE염색관찰,BAMG경탈세포처리후미견세포,탈세포효과량호.복합배양1주후,HE염색급소묘전경관찰구강점막세포여BAMG복합량호. 결론 토구강점막세포가재체외성공배양、확증,여동충이체BAMG복합후생장량호,위구건조직공정뇨도제공료일충신적선택.