CAJ | 학술논문

目的:构建人基因血小板衍化生长因子B(PDGF-B)真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B,并在293T细胞中进行瞬间表达.方法:采用PCR方法从购自美国典型培养物保藏中心含有PDGF-B基因全长cDAN序列的质粒中扩增出PDGF-B的cDAN片段,并与真核表达载体pIRES-EGFP连接双酶切鉴定,最后采用Lipofectamine 2000将重组质粒转入293T细胞中,利用荧光显微镜和Western blot进行表达鉴定.结果:真核表达栽体pIRES-EGFP-PDGF-B被成功构建,双酶切鉴定正确,载体能在293T细胞内正确地表达成熟的PDGF-B蛋白,并可分泌到细胞外.结论:成功构建了PDGF-B真核表达载体,为进一步利用PDGF-B对脊髓损伤进行基因治疗奠定基础.含有PDGF-B基因全长cDAN序列的质粒中扩增出PDGF-B的cDAN片段,并与真核表达裁体pIRES-EGFP连接双酶切鉴定,最后采用Lipofectamine 2000将重组质粒转入293T细胞中,利用荧光显微镜和Western blot进行表达鉴定.结果:真核表达栽体pIRES-EGFP-PDGF-B被成功构建,双酶切鉴定确,载体能在293T细胞内正确地表达成熟的PDGF
목적:구건인기인혈소판연화생장인자B(PDGF-B)진핵표체재체pIRES-EGFP-PDGF-B,병재293T세포중진행순간표체.방법:채용PCR방법종구자미국전형배양물보장중심함유PDGF-B기인전장cDAN서렬적질립중확증출PDGF-B적cDAN편단,병여진핵표체재체pIRES-EGFP련접쌍매절감정,최후채용Lipofectamine 2000장중조질립전입293T세포중,이용형광현미경화Western blot진행표체감정.결과:진핵표체재체pIRES-EGFP-PDGF-B피성공구건,쌍매절감정정학,재체능재293T세포내정학지표체성숙적PDGF-B단백,병가분비도세포외.결론:성공구건료PDGF-B진핵표체재체,위진일보이용PDGF-B대척수손상진행기인치료전정기출.함유PDGF-B기인전장cDAN서렬적질립중확증출PDGF-B적cDAN편단,병여진핵표체재체pIRES-EGFP련접쌍매절감정,최후채용Lipofectamine 2000장중조질립전입293T세포중,이용형광현미경화Western blot진행표체감정.결과:진핵표체재체pIRES-EGFP-PDGF-B피성공구건,쌍매절감정학,재체능재293T세포내정학지표체성숙적PDGF