生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2008年
11期
1320-1325
,共6页
金晓玲%巩菊芳%刘雪梅%王晓红%张日清
金曉玲%鞏菊芳%劉雪梅%王曉紅%張日清
금효령%공국방%류설매%왕효홍%장일청
水稻线粒体tRNATrp%色氨酰tRNA合成酶%氨酰化活力%突变体
水稻線粒體tRNATrp%色氨酰tRNA閤成酶%氨酰化活力%突變體
수도선립체tRNATrp%색안선tRNA합성매%안선화활력%돌변체
为了研究tRNATrp的氨基酸接受茎中除两对半碱基以外的特异性元件,设计并完成了4种水稻线粒体tRNATrp向枯草杆菌tRNATrp的突变体(MPB0,G1A和U5G/A68C;MPB1,C2G/G71C:MPB2,C4G/G69C;MPB3,C2G/G71C和C4G/G69C),体外转录并用枯草杆菌和人这两种不同种属来源的色氨酰tRNA合成酶(TrpRS)测定了这些tRNATrp分子的氨酰化活力(Kcat/KM.结果表明,这些突变体具有被枯草杆菌TrpRS氨酰化的能力,与野生型水稻线粒体tRNATrp>相比,MPB0被枯草杆菌TrpRS氨酰化的活力提高了5倍,MPB1和MPB2被枯草杆菌TrpRS氨酰化的活力分别提高了40和53倍,MPB3则提高了140倍,为野生型枯草杆菌tRNATrp>的34%,而人色氨酰tRNA合成酶氨酰化这4个突变体的活力都很微弱.揭示了水稻线粒体tRNATrp>氨基酸接受茎上的2个碱基对C2/G71和C4/G69的突变,对枯草杆菌TrpRS的识别起重要作用,由此推测,接受茎上的2个碱基对C2/G71和C4/G69也是线粒体tRNATrp>重要的特异性元件.
為瞭研究tRNATrp的氨基痠接受莖中除兩對半堿基以外的特異性元件,設計併完成瞭4種水稻線粒體tRNATrp嚮枯草桿菌tRNATrp的突變體(MPB0,G1A和U5G/A68C;MPB1,C2G/G71C:MPB2,C4G/G69C;MPB3,C2G/G71C和C4G/G69C),體外轉錄併用枯草桿菌和人這兩種不同種屬來源的色氨酰tRNA閤成酶(TrpRS)測定瞭這些tRNATrp分子的氨酰化活力(Kcat/KM.結果錶明,這些突變體具有被枯草桿菌TrpRS氨酰化的能力,與野生型水稻線粒體tRNATrp>相比,MPB0被枯草桿菌TrpRS氨酰化的活力提高瞭5倍,MPB1和MPB2被枯草桿菌TrpRS氨酰化的活力分彆提高瞭40和53倍,MPB3則提高瞭140倍,為野生型枯草桿菌tRNATrp>的34%,而人色氨酰tRNA閤成酶氨酰化這4箇突變體的活力都很微弱.揭示瞭水稻線粒體tRNATrp>氨基痠接受莖上的2箇堿基對C2/G71和C4/G69的突變,對枯草桿菌TrpRS的識彆起重要作用,由此推測,接受莖上的2箇堿基對C2/G71和C4/G69也是線粒體tRNATrp>重要的特異性元件.
위료연구tRNATrp적안기산접수경중제량대반감기이외적특이성원건,설계병완성료4충수도선립체tRNATrp향고초간균tRNATrp적돌변체(MPB0,G1A화U5G/A68C;MPB1,C2G/G71C:MPB2,C4G/G69C;MPB3,C2G/G71C화C4G/G69C),체외전록병용고초간균화인저량충불동충속래원적색안선tRNA합성매(TrpRS)측정료저사tRNATrp분자적안선화활력(Kcat/KM.결과표명,저사돌변체구유피고초간균TrpRS안선화적능력,여야생형수도선립체tRNATrp>상비,MPB0피고초간균TrpRS안선화적활력제고료5배,MPB1화MPB2피고초간균TrpRS안선화적활력분별제고료40화53배,MPB3칙제고료140배,위야생형고초간균tRNATrp>적34%,이인색안선tRNA합성매안선화저4개돌변체적활력도흔미약.게시료수도선립체tRNATrp>안기산접수경상적2개감기대C2/G71화C4/G69적돌변,대고초간균TrpRS적식별기중요작용,유차추측,접수경상적2개감기대C2/G71화C4/G69야시선립체tRNATrp>중요적특이성원건.
