含Apoptin基因重组腺病毒的构建及鉴定
함Apoptin기인중조선병독적구건급감정
Construction and identification of the recombinant adenovirus expressing Apoptin gene of chicken anemia virus
  • 万方数据
    世界华人消化杂志 세계화인소화잡지
    WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
    2008年 31期 3505-3509 ,共5页

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    Apoptin基因%腺病毒载体%基因治疗%逆转录-聚合酶链反应%免疫印迹法 Apoptin基因%腺病毒載體%基因治療%逆轉錄-聚閤酶鏈反應%免疫印跡法
    Apoptin기인%선병독재체%기인치료%역전록-취합매련반응%면역인적법
    目的:构建携凋亡素(Apoptin)基因重组腺病毒,为进一步研究Apoptin基因抗肿瘤作用分子机制建立基础.方法:利用BamH Ⅰ和Spe Ⅰ双酶切质粒pVAXl Apoptin,获得Apoptin片段并连接入pacAd5 CMV K-N pA,构建含Apoptin基因的穿梭质粒pacAd5-Apoptin.利用尸盘Pac Ⅰ单酶切对pacAd5-Apoptin和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Westem blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:所构建重组腺病毒中的Apoptin基因得到了正确转录,表达产物的相对分子质量约为13 kDa,与CVA阳性对照一致;所获得重组腺病毒可有效表达Apoptin蛋白,该蛋白与CAV阳性血清具有反应原性,重组病毒滴度为1011PFU/L.结论:成功构建含Apoptin基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求.
    목적:구건휴조망소(Apoptin)기인중조선병독,위진일보연구Apoptin기인항종류작용분자궤제건립기출.방법:이용BamH Ⅰ화Spe Ⅰ쌍매절질립pVAXl Apoptin,획득Apoptin편단병련접입pacAd5 CMV K-N pA,구건함Apoptin기인적천사질립pacAd5-Apoptin.이용시반Pac Ⅰ단매절대pacAd5-Apoptin화선병독기인조질립(pAd5)진행선성화처리후응용지질체개도법공전염AAV-293세포,분별이용식반순화화RT-PCR、Westem blot등방법대중조병독진행사선화감정,병측정소획득중조병독적적도.결과:소구건중조선병독중적Apoptin기인득도료정학전록,표체산물적상대분자질량약위13 kDa,여CVA양성대조일치;소획득중조선병독가유효표체Apoptin단백,해단백여CAV양성혈청구유반응원성,중조병독적도위1011PFU/L.결론:성공구건함Apoptin기인적중조선병독,소획득중조병독적적도가이만족체내외실험요구.
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