CAJ | 학술논문

目的:建立精氨酸脱亚氨酶的高效表达菌种和纯化工艺路线.方法:人工合成编码支原体精氨酸脱亚氨酶(arginine deiminase,ADI)的基因,构建pBV220-ADI原核表达载体,转染大肠杆菌DH5α中并诱导表达目的蛋白,离子交换层析和分子筛层析法纯化目标蛋白.采用体外精氨酸降解试验测定纯化产物活性.结果:成功构建了原核表达载体pBV220-ADI,基因测序正确.转化大肠杆菌DH5α后筛选到高水平表达目的蛋白的菌株,目标蛋白以包涵体形式存在于胞浆内,表达水平超过全菌体蛋白的35%.采用盐酸胍溶解包涵体、低温条件下稀释和透析的方法进行复性.顺次采用阳离子交换和凝胶过滤层析对复性液进行纯化,最终获得纯度达到95%的活性产物.活性测定表明,纯化的ADI比活性为80IU/mg.结论:成功构建了ADI的高效表达菌种,建立了目标物质的分离纯化方法.
목적:건립정안산탈아안매적고효표체균충화순화공예로선.방법:인공합성편마지원체정안산탈아안매(arginine deiminase,ADI)적기인,구건pBV220-ADI원핵표체재체,전염대장간균DH5α중병유도표체목적단백,리자교환층석화분자사층석법순화목표단백.채용체외정안산강해시험측정순화산물활성.결과:성공구건료원핵표체재체pBV220-ADI,기인측서정학.전화대장간균DH5α후사선도고수평표체목적단백적균주,목표단백이포함체형식존재우포장내,표체수평초과전균체단백적35%.채용염산고용해포함체、저온조건하희석화투석적방법진행복성.순차채용양리자교환화응효과려층석대복성액진행순화,최종획득순도체도95%적활성산물.활성측정표명,순화적ADI비활성위80IU/mg.결론:성공구건료ADI적고효표체균충,건립료목표물질적분리순화방법.