CAJ | 학술논문

本项研究的目的是构建东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因奠定基础.用TRIzol试剂提取东方田鼠肝脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA末端加上EcoRⅠ/HindⅢ定向接头并用EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切,使其两端分别带EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端.用Mini Column纯化、收集300 bp以上的双链cDNA片段,再连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.经测定,库容量为1.3×107 PFU/mL,扩增后文库滴度为1.8×1011 PFU/mL.对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91.7%,阳性克隆片段大小分布在200 bp～1 000 bp,其中有95.5%的插入片段大于300 bp.用日本血吸虫童虫可溶性抗原对文库进行了初筛,得到了21个ESTs,将这些阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中大部分克隆诱导的童虫死亡率比阴性噬菌体对照高出2%～13%.
본항연구적목적시구건동방전서간장T7서균체전시cDNA문고,위사선동방전서항혈흡충병항성상관기인전정기출.용TRIzol시제제취동방전서간장총RNA,분리순화mRNA,경반전록합성쌍련cDNA.재쌍련cDNA말단가상EcoRⅠ/HindⅢ정향접두병용EcoRⅠ화Hind Ⅲ매절,사기량단분별대EcoRⅠ화HindⅢ점성말단.용Mini Column순화、수집300 bp이상적쌍련cDNA편단,재련접우대유EcoRⅠ화HindⅢ말단적T7 Select 10-3b재체,경체외포장후,이BLT5403위수체균구건T7서균체전시cDNA문고.경측정,고용량위1.3×107 PFU/mL,확증후문고적도위1.8×1011 PFU/mL.대종원시문고중수궤도취적100개서균반진행PCR감정,중조솔위91.7%,양성극륭편단대소분포재200 bp～1 000 bp,기중유95.5%적삽입편단대우300 bp.용일본혈흡충동충가용성항원대문고진행료초사,득도료21개ESTs,장저사양성서균체극륭화혈흡충동충공배양,기중대부분극륭유도적동충사망솔비음성서균체대조고출2%～13%.