CAJ | 학술논문

背景与目的:有研究发现P53氨基端15肽与穿膜肽(antennapedia,Ant)的融合肽能迅速穿透细胞膜.直接、快速引起乳腺癌、胰腺癌细胞坏死而非凋亡.但对正常细胞几乎没有毒性.本研究构建缺陷型腺病毒载体表达NT4p53(N15)Ant融合基因,研究其体外抑瘤作用.方法:应用Ad-EasyTM系统,在大肠杆菌同源重组,构建NT4p53(N15)Ant腺病毒表达载体,在HEK-293细胞内成功包装并鉴定后,感染肝癌细胞株HepG2,用倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞形态学变化、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验及培养基中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)测定研究其体外抑瘤作用.结果:Ad-NT4p53(N15)Ant对肝癌细胞株HepG2有明显抑制作用,48、72、96 h细胞存活率分别为36.67%、20.47%、17.82%,与空病毒处理组比较差异有统计学意义(P＜0.05);电镜观察到感染的HepG2细胞胞膜、核膜破坏,胞浆内出现囊泡状物质,染色质聚集.Ad-NT4p53(N15)Ant 处理HepG2细胞24、48、72、96 h时培养液中LDH释放分别为94、236、267、313 U/L,较空病毒处理组明显增加,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论:构建的腺病毒载体Ad-NT4p53(N15)Ant感染HepG2细胞后能抑制细胞增殖.
배경여목적:유연구발현P53안기단15태여천막태(antennapedia,Ant)적융합태능신속천투세포막.직접、쾌속인기유선암、이선암세포배사이비조망.단대정상세포궤호몰유독성.본연구구건결함형선병독재체표체NT4p53(N15)Ant융합기인,연구기체외억류작용.방법:응용Ad-EasyTM계통,재대장간균동원중조,구건NT4p53(N15)Ant선병독표체재체,재HEK-293세포내성공포장병감정후,감염간암세포주HepG2,용도치상차현미경、투사전경관찰세포형태학변화、사갑기우담서람(MTT)비색실험급배양기중적유산탈경매(lactate dehydrogenase,LDH)측정연구기체외억류작용.결과:Ad-NT4p53(N15)Ant대간암세포주HepG2유명현억제작용,48、72、96 h세포존활솔분별위36.67%、20.47%、17.82%,여공병독처리조비교차이유통계학의의(P＜0.05);전경관찰도감염적HepG2세포포막、핵막파배,포장내출현낭포상물질,염색질취집.Ad-NT4p53(N15)Ant 처리HepG2세포24、48、72、96 h시배양액중LDH석방분별위94、236、267、313 U/L,교공병독처리조명현증가,기차이유통계학의의(P＜0.05).결론:구건적선병독재체Ad-NT4p53(N15)Ant감염HepG2세포후능억제세포증식.