腺病毒携带人内皮抑素基因在舌癌细胞和血管内皮细胞中的表达
선병독휴대인내피억소기인재설암세포화혈관내피세포중적표체
  • 万方数据
    中山医科大学学报 중산의과대학학보
    ACADEMIC JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
    2002年 z1期 4-7 ,共4页

    陈宇%丁学强%李立%黄嘉凌%刘然义%冼励坚%赖坤%吴秀菊%柯妙拉%曾益新%黄文林

    진우%정학강%리립%황가릉%류연의%승려견%뢰곤%오수국%가묘랍%증익신%황문림

    口腔肿瘤%癌,鳞状细胞%腺病毒%血管内皮抑素%基因治疗 口腔腫瘤%癌,鱗狀細胞%腺病毒%血管內皮抑素%基因治療
    구강종류%암,린상세포%선병독%혈관내피억소%기인치료
    [目的]以腺病毒携带的人内皮抑素基因-Endostatin基因(Ad/hEnd)感染舌癌细胞株Tca8113和人脐静脉内皮细胞株ECV304,观察其在舌癌细胞和静脉内皮细胞株中的表达.[方法]用293细胞扩增Ad/hEnd,并抽提、纯化.以10 MOI的Ad/GFP感染ECV细胞,观察细胞中表达绿色荧光蛋白的细胞所占的比例.采用免疫组化法检测Endostatin蛋白在感染了Ad/hEnd的Tca细胞和ECV细胞中的表达.Ad/hEnd感染Tca细胞后收集细胞培养液上清,ELISA检测上清中Endostatin蛋白含量.Western-blot检测Endostatin蛋白在Tca和ECV细胞中的表达.[结果]扩增的Ad/hEnd通过空斑形成试验准确测定其滴度可达1×1010～8×1010 PFU/mL.表达绿色荧光蛋白的细胞所占的比例为31%.实验显示感染Ad/hEnd后,在Tca细胞和ECV细胞胞浆内有Endostatin蛋白合成.细胞培养液上清中Endostatin蛋白表达浓度呈时间剂量依赖关系,最高达到597 μg/L.Western-blot检测显示Endostatin蛋白可在两种细胞中高效表达,相对分子质量与自然Endo-statin蛋白一致,无杂合蛋白,呈剂量依赖关系,且持续到第7天仍呈明显的Endostatin蛋白质条带.[结论]本实验制备的重组腺病毒Ad/hEnd能在舌癌细胞和血管内皮细胞中有效表达Endostatin蛋白,可用于抗肿瘤血管生成的Endostatin基因治疗的实验研究.
    [목적]이선병독휴대적인내피억소기인-Endostatin기인(Ad/hEnd)감염설암세포주Tca8113화인제정맥내피세포주ECV304,관찰기재설암세포화정맥내피세포주중적표체.[방법]용293세포확증Ad/hEnd,병추제、순화.이10 MOI적Ad/GFP감염ECV세포,관찰세포중표체록색형광단백적세포소점적비례.채용면역조화법검측Endostatin단백재감염료Ad/hEnd적Tca세포화ECV세포중적표체.Ad/hEnd감염Tca세포후수집세포배양액상청,ELISA검측상청중Endostatin단백함량.Western-blot검측Endostatin단백재Tca화ECV세포중적표체.[결과]확증적Ad/hEnd통과공반형성시험준학측정기적도가체1×1010～8×1010 PFU/mL.표체록색형광단백적세포소점적비례위31%.실험현시감염Ad/hEnd후,재Tca세포화ECV세포포장내유Endostatin단백합성.세포배양액상청중Endostatin단백표체농도정시간제량의뢰관계,최고체도597 μg/L.Western-blot검측현시Endostatin단백가재량충세포중고효표체,상대분자질량여자연Endo-statin단백일치,무잡합단백,정제량의뢰관계,차지속도제7천잉정명현적Endostatin단백질조대.[결론]본실험제비적중조선병독Ad/hEnd능재설암세포화혈관내피세포중유효표체Endostatin단백,가용우항종류혈관생성적Endostatin기인치료적실험연구.
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